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哈靈生物教大家辨別胎牛血清使用中的常見問題
閱讀：1745 發(fā)布時間：2015-5-15哈靈生物教大家辨別胎牛血清使用中的常見問題
1、 如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，
融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。長時間儲存在2-8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、
纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。因此，推薦在-20℃以下儲存血清,，
并避免反復凍融,。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,，請勿超過一個月。若一次無法用
完一瓶,，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)（由于血清結凍時體積會增加約10 %,， 必須預留
此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形）,，再放回冷凍,。
2、血清中包含絮狀沉淀,，它們是什么,，怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,，不會影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀，離心血清(400g,，
1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用
過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾),。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就
會再溶解,。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,，沉淀會自然消失,。
3、實驗室如何選擇適合的血清?
國內(nèi)一致認為HYCLONE的血清是的,，但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,，國外一般認為GIBCO比HYCLONE好，
所以并不是價格決定質(zhì)量,，但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,，一般不是太嬌氣的細胞，國產(chǎn)的就夠
用了。此外,，由于國內(nèi)HYCLONE,，GIBCO并沒有生產(chǎn)線，我們只能從代理商那里買,，而代理商又魚龍混
雜,，所以買到假貨的可能性也很大。所以,，我一般會從直銷員那里買血清,，有的國外生物公司由于剛
剛進入中國，度不高,，但是其實在國外已經(jīng)做得很不錯了,，如Wisent等，他們在國內(nèi)有辦事處,，
我會從那里拿,，血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下，但價格相對優(yōu)惠很多,。
4,、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：
(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時,，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,，否則血清會變得渾濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破
壞，從而影響血清的品質(zhì),。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要，可以無須做此步驟,。
(6) 若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃，30分鐘的原則,，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高，時間過久
或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多,。
5,、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,，您應該在兩到三周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清
中的基本成分在解凍后就開始降解。
6,、 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮,，細胞和血小板釋放組胺,，
激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,，培養(yǎng)ES細胞,、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清,。
7、 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞
的生長只有微小的促進,，或*沒有任何作用,，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細
胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下
觀察,，像是“小黑點",，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會使
此沉淀物更增多,，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
若非必須,，可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!
8,、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后,，在鏡下觀察
培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),，黑點是否游動。如果細胞被污染,，微生物則會大量繁殖,，培養(yǎng)基就會迅速變黃、
變混濁,。污染包括細菌污染,、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞,，生長狀態(tài)良好,，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化,，那么,，黑點的出現(xiàn)可能與
以下幾種情況有關：
(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,，反復凍融的結果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,，不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格,?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,，可能是原代組織中的雜質(zhì),，多次傳代可以消除。
9,、 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù),。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持佳PH值7.0- 7.2,。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),，容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的佳時機,，細胞切勿生長過老,。
10、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?
來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的
胎牛的血清,，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛,。
組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子,、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,，
用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長,，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同,，
一般在5%-10%,，有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃,，若存放在4℃不可超過一個月,。解凍血清時 ，應
先將血清至于2-8℃冰箱,，并經(jīng)常搖勻使之溶解,，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直
接放入37℃水浴或者溫箱中,，如放在37℃解凍,，顏色加深，粘稠度也會增加,，血清在解凍和熱滅活后,，
應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融,。