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DMEM培養(yǎng)基配置的方法以及注意事項(xiàng)
閱讀:5119 發(fā)布時(shí)間:2013-9-18配制DMEM培養(yǎng)基過濾前和過濾后的NaHCO3,,雙抗體可以添加,,也可以不加,能加入漿液過濾,,在好的或,,見細(xì)胞和血清濃度,不同,,不同的細(xì)胞需要的同時(shí),,凍存細(xì)胞需要培養(yǎng)基血清含量較高,一般為20%-30%,。此外,,包裝后的培養(yǎng)基和血清過濾,除了被用于一瓶,,其他存儲在-20度,,或一部分,如谷氨酰胺易降解。
配制DMEM培養(yǎng)基可以先用后的體積是2/3的水溶解配制,,包裝袋也需要清洗,。2G*溶解的碳酸氫鈉此外,加雙抗后,,定容至終體積,。過濾到零下20攝氏度保存。添加血清的時(shí)候,。
根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),,配制DMEM培養(yǎng)基正常血清沒有過濾,雙抗體不需要過濾,,可添加在前面(如果需要的話,,除非雙反)培養(yǎng)基的罕見的內(nèi)容,否則就不需要在零下20攝氏度保存,,培養(yǎng)兩周跑出去不在4存儲任何問題,。另外,我不同意與冷凍細(xì)胞明顯高于血清,,沒有根據(jù),。在ATCC細(xì)胞凍存的描述看,我很少使用血清,,一般10%二甲基亞砜+90%和冷凍液配方血清中是常用的,。凍存存活率*的細(xì)胞。(當(dāng)然,,冷凍也是非常重要的存儲過程)
配制DMEM培養(yǎng)基時(shí)血清不必要過濾,,但我認(rèn)為雙反應(yīng)進(jìn)行過濾,畢竟,,是不是很麻煩,。同時(shí)對細(xì)胞冷凍血清添加量存在著一定的問題,重要的是冷凍程序,,如離心速度不太大,,有二甲基亞砜的量不能超過10%,這是非常重要的,。
配制DMEM培養(yǎng)基除了DMEM粉末直接加入,,也應(yīng)按照說明書添加碳酸氫鈉適量,它是關(guān)于2G,,pH值可能遠(yuǎn)大于你所需要的pH值,,再加入適量HEPES,約2.38g,,pH滿意度,,根據(jù)需要添加雙抗,,過濾,分裝,。如果數(shù)量不多,,儲存超過20度,必要時(shí)添加血清,,血清是不需要消毒,,因?yàn)楹细裱逡堰_(dá)到無菌的條件下,搖它