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人S-100ELISA試劑盒操作說(shuō)明書(shū)
閱讀：1657 發(fā)布時(shí)間：2013-8-7
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人S-100ELISA試劑盒 說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)范圍:78 pg/mL -5000 pg/mL;
人S-100ELISA試劑盒的組成以及試劑配制方法：
1.酶聯(lián)板:一塊（96孔）
2.標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋到1ml,，蓋好后靜置10分鐘以上,，然后反復(fù)搖晃以助溶解，其濃度為5000 pg/mL,，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋成5000 pg/mL，2500 pg/mL,，1250 pg/mL,，625 pg/mL，312.5 pg/mL,，156 pg/mL,，78 pg/mL其原液直接當(dāng)作高標(biāo)準(zhǔn)濃度,，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/mL,，要臨用前15分鐘內(nèi)配制,。如配制2500 pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml 5000 pg/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可,，其余濃度以此類(lèi)推,。
3.樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4.檢測(cè)稀釋液A:1×10ml/瓶,。
5.檢測(cè)稀釋液B:1×10ml/瓶,。
6.檢測(cè)溶液A:1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100ul），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如1ul檢測(cè)溶液A加99ul檢測(cè)稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制,。
7.檢測(cè)溶液B:1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測(cè)稀釋液B1:100稀釋,。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8.底物溶液:1×10ml/瓶,。
9.濃洗滌液:1×30ml/瓶,，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.終止液:1×10ml/瓶（2N H2SO4）,。
標(biāo)本的采集及保存：
1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)離心后收集上清,，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.血清:標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)液后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。
操作步驟：
各試劑在使用前平衡到室內(nèi)溫度。
1.加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔。除空白孔外,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul,，注意不要有氣泡，輕輕混和均勻,，酶標(biāo)板加上蓋,，在37℃下反應(yīng)120分鐘,。
2.棄倒掉液體，甩干,，不用洗滌,。
3.每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘,洗板3次,，350ul/每孔,，甩干。
4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液（100ul）,，37℃,60分鐘,洗板5次,，甩干。
5.依序每孔加底物溶液90ul,，37℃避光顯色30分鐘（此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯）。
6.依序每孔加終止溶液50ul,，終止反應(yīng)（此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色）,。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。
注：
1.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,，該孔不填加任何試劑,，只是后加底物溶液及2NH2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零,。
2.為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。
洗板方法:
1.手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次,。
2.自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)）,，OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)）,，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。
特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人S-100,，且與其它相關(guān)蛋白沒(méi)有交叉反應(yīng)。
注意事項(xiàng)：
1.洗滌過(guò)程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性,。
2.一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
3.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。
4.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù),。
5.在配制標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆,。
6.底物須避光保存。
說(shuō)明:
1.剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少量水樣物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。
2.濃洗滌液會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3.中,、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處,，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
4.保存條件:-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）,；2-8℃（頻繁使用時(shí)）,。
5.人S-100ELISA試劑盒有效時(shí)間:6個(gè)月