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菜鳥做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的一些心得體會(huì)
閱讀：4391 發(fā)布時(shí)間：2013-8-6菜鳥ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之標(biāo)本搜集
這個(gè)很要害呀,！標(biāo)本搜集及保管的好壞，直接決議了試驗(yàn)?zāi)芊癯晒?。在搜集?biāo)本之前有必要考慮到試驗(yàn)對(duì)標(biāo)本搜集及保管的需求,，這些需求對(duì)標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)穩(wěn)定性影響很大。以ELISA為例,。ELISA檢測(cè)的通常是液態(tài)標(biāo)本,，應(yīng)在搜集到新鮮標(biāo)本后當(dāng)即離心留取上清液1ml左右移入高溫滅菌過的1.5ml EP管中。這種標(biāo)本在4度保管48小時(shí),，-20度保管1個(gè)月,，-80度保管6個(gè)月對(duì)檢測(cè)影響不大。
樣本通常都是怕重復(fù)凍融的,，這樣會(huì)使蛋白降解,，如需做預(yù)試驗(yàn)或需重復(fù)取用標(biāo)本時(shí)，應(yīng)在搜集時(shí)即分裝幾個(gè)EP管（管外注意用標(biāo)號(hào)筆標(biāo)記好,，否則就會(huì)牛頭不對(duì)馬嘴了?。２蛔⒁膺@些需求,，即便試驗(yàn)做的再美麗也是瞎的,，不大會(huì)出成果。
菜鳥ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備以及開始實(shí)驗(yàn)
.試驗(yàn)前的預(yù)備工作那是適當(dāng)?shù)闹匾?。要用到?00ul中槍頭,、1000ul大槍頭、1.5ml EP管事前滅菌好是有必要的,；屢次運(yùn)用的酶標(biāo)板框洗凈烘干,。
100ul加樣槍及槍頭，1000ul加樣槍及槍頭,，100ml量筒（洗凈并雙蒸水沖刷）,，500ml量杯（洗凈并雙蒸水沖刷，試驗(yàn)室沒有更小的了）,，雙蒸水100ml（稀釋洗滌液用）,，吹氣球,，吸水紙（定性濾紙），試管架,，避光濕盒,，酶標(biāo)板框，定時(shí)器,，膠帶,，剪刀，棄物盒及廢液缸,。
預(yù)備試驗(yàn)時(shí)進(jìn)入試驗(yàn)室即翻開37度恒溫箱讓它開端升溫,，否則比及需求用時(shí)再翻開，你急它不急,，它升溫需求時(shí)刻,，能夠現(xiàn)已過了要溫育的時(shí)刻它才到達(dá)37度；樣品和試劑盒在室溫下平衡30分鐘以上,。
ELISA試劑盒固化的抗體在底部,，加樣時(shí)槍頭千萬不要碰究竟部；用不完整個(gè)試劑盒能夠分隔用,，但分時(shí)必定不要摸底部,，緣由同前。試驗(yàn)前佳自個(gè)寫一個(gè)操作進(jìn)程,，把操作中注意事項(xiàng)寫明白,。不要只看著試劑盒闡明書做，由于闡明書是把操作程序和注意事項(xiàng)分隔寫了,，看不過來,，別的闡明書上許多東西究竟寫的不具體，網(wǎng)上的經(jīng)歷參閱也要寫在操作進(jìn)程里,，越具體越好,；
通常一批標(biāo)本只會(huì)運(yùn)用有些試劑和微孔板，事前計(jì)算好需求的試劑量,，分別用1ml注射器抽取比需求量多做3-5個(gè)標(biāo)本的試劑轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的1.5mlEP管中,，注意1ml注射器不要混用，做到一劑一個(gè)注射器,。別的顯色液B要避光,，轉(zhuǎn)移時(shí)關(guān)燈，放的EP管用黑紙包??；
加樣槍的運(yùn)用：運(yùn)用前調(diào)整加樣槍加樣量（如我的ELISA試劑盒通常是50ul）,，吸試劑時(shí)按到有阻力感就行了,，若是按究竟,，加樣量必定超越槍上標(biāo)明的量了；打出試劑時(shí)按到有阻力感后持續(xù)下按究竟以便排盡槍頭中的試劑,；加顯色劑B時(shí)要關(guān)燈而且敏捷,，加好后用避光袋包住或放在避光濕盒中再孵育；加樣時(shí)盡量防止發(fā)生氣泡,，如有氣泡成生,，可用吹氣球吹破之；
每次孵育時(shí)用膠帶封住酶標(biāo)板口,，防止水份蒸騰,。微孔板通常是一排8個(gè)，在其一端排頭的邊際用記號(hào)筆標(biāo)記下次序（如1,，2,，3...），防止手藝洗板進(jìn)程中板朝下拍時(shí)不小心致微孔板掉出酶標(biāo)板框而無法承認(rèn)次序,。
加標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)每次都要替換一個(gè)槍頭,，防止重復(fù)運(yùn)用槍頭而穿插污染； 37度溫育后千萬不要忘掉倒掉微孔板中的液體（包括未結(jié)合上的酶聯(lián)親和物,，其殘留必定形成假陽性）,，而且要重復(fù)用稀釋好的洗滌劑洗板；洗板能夠多洗幾回,，沒壞處,；
洗板可用50ml或20ml注射器針管+1ml注射器針頭抽洗滌液直接往微孔中沖刷，注意針頭安牢,，否則壓力大時(shí)把針頭沖到微孔里劃到孔底,，很多洗滌劑沖入就不好玩了。 應(yīng)做預(yù)試驗(yàn)和規(guī)范曲線,，若是大都樣本測(cè)值在高OD值處動(dòng)搖,，要稀釋后再重做，然后按稀釋倍數(shù)算出來終成果,，因?yàn)樵噭┖惺怯袦y(cè)驗(yàn)規(guī)模的,。