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辛基-瓊脂糖凝膠 4FF
閱讀：1862 發(fā)布時間：2013-6-4辛基-瓊脂糖凝膠 4FF是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠4FF上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì),。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離,。
1 外觀
本品為白色球狀凝膠,無嗅,、無味、無肉眼可見雜質(zhì),。
2.理化指標
| 項 目 | 指 標 | |
| 配 基 | R-O-CH2-CH（OH）-CH2-O- （CH2）7-CH3 | |
| 基 質(zhì) | 4% 交聯(lián)瓊脂糖 | |
| 形狀 | 球形 | |
| 粒徑 | 45~165 μm | |
| 配基密度 | 5 μmol octyl/ml medium | |
| 高流速（25℃） | 100KPa下≧150 cm/h* | |
| 耐 壓 | 0.15 MPa | |
| 耐 熱 | pH水中120℃20min | |
| 工作溫度 | 4~40℃ | |
| pH適用范圍 | 2~14（短時間,，在位清洗）,；3~12（長時間） | |
| 化學穩(wěn)定性 | 以下溶液中穩(wěn)定； 1mol/L NaOH,；70%EtOH,；30%異丙醇,；0.5%SDS；6mol/L鹽酸胍,；8mol/L尿素,；3 mol/L（NH4）2SO4 | |
*柱子：內(nèi)徑50mm、柱長30cm,。柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl,。
3 包裝
產(chǎn)品以無菌試劑瓶密封包裝，外貼標簽,，注明“品名,、體積、顆粒大小、應(yīng)用,、生產(chǎn)單位”等內(nèi)容,。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運輸和貯存,。
4 運輸
運輸中應(yīng)避免日曬,、雨淋、重壓,，嚴禁與有毒,、有害物品混運。
5 貯存
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉）,，通風,、干燥、清潔的地方,。不能冷凍,。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
6 保質(zhì)期：
3年,。
7 應(yīng)用
辛基-瓊脂糖凝膠 4FF是一種疏水層析介質(zhì),，利用樣品中組分疏水性的不同進行分離。用于生物大分子的純化分離,。
下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程,。
7.1 裝柱
（1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液,。
（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,，清洗掉20%乙醇，抽干,，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿,。
（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡,。
（4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
（5）打開蠕動泵,，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子,。
7.2 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,，到流出液電導和pH不變,。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L（NH4）2SO4等,。
7.3 上樣
（1）樣品用平衡液配制,，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
（2）一般情況是讓目標產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,，用平衡液洗去雜質(zhì),，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)品。
（3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì),、流動相的離子強度和溫度,。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強,，介質(zhì)對組分吸附牢,。
7.4 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫,。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,，如0.02~0.05mol/L的PBS。
7.5 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,，洗10倍以上柱體積,，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用,。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉,，可用在位清洗（CIP）除去。
7.6 在位清洗
（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,，可以用2M Nacl去除,。
（2）對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,，可用1M NaOH 去除,。
（3）對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡,。
清洗完畢后,，用至少3倍緩沖液平衡柱子,。
7.7注意
在裝柱,、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干,，氣泡進入,。
7.8 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時,。或用以下方法步驟去除：
（1）2倍柱體積的70%乙醇,；
（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5,；
（3）1倍柱體積4M尿素；
（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl,；
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制,。
7.9 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子,。