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細(xì)菌糖類(lèi)總量硫酸-苯酚比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
閱讀：691 發(fā)布時(shí)間：2023-9-19
細(xì)菌糖類(lèi)總量硫酸-苯酚比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
主要用途
細(xì)菌糖類(lèi)總量硫酸-苯酚比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)硫酸處理后,，水解產(chǎn)生單糖,，與苯酚反應(yīng),，生成黃色產(chǎn)物,，即采用比色法測(cè)算糖類(lèi)總量的而經(jīng)典的技術(shù)方法,。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的,。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞樣品中糖類(lèi)總量的檢測(cè),。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)捷,，性能穩(wěn)定,，檢測(cè)敏感。
技術(shù)背景
糖類(lèi)（saccharide）,，又稱為碳水化合物（carbohydrate）,，其分成四類(lèi)：?jiǎn)翁牵?/span>monosaccharide；例如葡萄糖）,、二糖（disaccharide,；例如蔗糖）、寡糖（oligosaccharide,；棉籽糖）和多糖（polysaccharide,；例如淀粉和糖原）。糖類(lèi)構(gòu)成輔酶和核酸,，以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要元素,，在能量?jī)?chǔ)存、免疫功能,、授精,、預(yù)防病理變化、血液凝結(jié),、發(fā)育等方面具有重要作用,。使用濃硫酸，將復(fù)雜性多糖水解成單糖,，脫水產(chǎn)生反應(yīng)性中間產(chǎn)物,，與苯酚反應(yīng)，生成黃色產(chǎn)物,，在分光光度儀（492nm 波長(zhǎng)）下出現(xiàn)吸光峰值的變化,，來(lái)定量測(cè)定樣品中糖類(lèi)量的總含量。
產(chǎn)品內(nèi)容
稀釋液（Reagent A） 5毫升
反應(yīng)液（Reagent B） 5毫升
酸性液（Reagent C） 25毫升
標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D） 500微升
裂解液（Reagent E） 10毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里,；酸性液（Reagent C）具有腐蝕性,，注意操作安全；反應(yīng)液（Reagent B）避免光照,；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和反應(yīng)的容器
干式恒溫儀或恒溫水槽：用于反應(yīng)孵育
超聲儀：用于裂解細(xì)菌細(xì)胞
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一,、 樣品準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好10毫升待測(cè)的細(xì)菌放進(jìn)37℃搖床孵育16小時(shí)，速度為220RPM
2． 直至OD600＝0.4至0.8,，即1至2 X 107細(xì)胞/毫升
3． 置于冰槽里5分鐘
4． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,，速度為1000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入500微升裂解液（Reagent E）,，充分混勻
7． 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管
8． 強(qiáng)力渦旋震蕩15秒
9． 置于超聲儀下：200瓦，50%功率,，10秒一次,，重復(fù)3次
10． 冰槽里靜置15分鐘
11． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM,，例如eppendorf 5415）
12． 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管
13． 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）
14． 即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二,、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制
1． 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
2． 分別加入200微升稀釋液（Reagent A）到每個(gè)離心管
3． 移取200微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到1號(hào)管,，混勻
4． 小心移取200微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到2號(hào)管,，混勻
5． 小心移取200微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到3號(hào)管，混勻
6． 小心移取200微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到4號(hào)管,，混勻
7． 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表
管號(hào) | 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D） | 稀釋液（Reagent A） | 測(cè)定體系中 標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖含量 |
1 | 200微升 | 200微升 | 50微克 |
2 | 200微升1號(hào)管 | 200微升 | 25微克 |
3 | 200微升2號(hào)管 | 200微升 | 12.5微克 |
4 | 200微升3號(hào)管 | 200微升 | 6.125微克 |
5 | —— | 200微升 | 0 |
三,、 樣品測(cè)定
1． 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)492nm,，并置零
2． 分別移取200微升反應(yīng)液（Reagent B）到1.5毫升離心管
3． 分別加入200微升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測(cè)樣品，混勻
4． 分別加入1毫升酸性液（Reagent C）,，混勻
5． 在80℃干式恒溫儀孵育30分鐘（注意：如果復(fù)雜多糖無(wú)法充分水解,，建議使用煮沸5至30分鐘處理）
6． 室溫下冷卻10分鐘，避免光照
7． 轉(zhuǎn)移到新的比色皿
8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)（492nm波長(zhǎng)）：獲得吸光讀數(shù)
9． 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光讀數(shù),；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖含量（微克）
10． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)麥芽糖含量（微克）
11． 計(jì)算樣品實(shí)際麥芽糖濃度（微克/毫升）
【根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)麥芽糖含量（微克）÷0.2（樣品容量：毫升）】×10（樣品稀釋倍數(shù)）=微克/毫升
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為25次操作,，包括標(biāo)準(zhǔn)液
2． 本產(chǎn)品適用于還原性、非還原性糖類(lèi),、寡糖以及復(fù)雜性糖類(lèi),，但不適合于氨基糖或脫氧糖及其衍生物
3． 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍為0.2至50微克糖類(lèi)總量
4． 本產(chǎn)品適用于96孔板操作，實(shí)際用量按比例減少
5． 操作時(shí),，須戴手套
6． 酸性液（Reagent C）具有腐蝕性,，注意操作安全
7． 孵育時(shí)，避免光照
8． 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低,，可以稀釋樣品用量,；注意在計(jì)算實(shí)際濃度時(shí)，不要忘記稀釋倍數(shù)調(diào)整
9． 糖類(lèi)總量表述方式：微克麥芽糖/毫升,；微克麥芽糖/細(xì)胞量,；微克麥芽糖/總蛋白量
10． 本公司提供系列糖類(lèi)檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感