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特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書

主要用途

特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑是一種旨在通過(guò)特殊脫蠟處理,，進(jìn)

而使用膽固醇酯酶水解和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇反應(yīng),，形成復(fù)合體,，并產(chǎn)生藍(lán)色

熒光,，分析石蠟包埋組織切片中總膽固醇的而經(jīng)典的技術(shù)方法,。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良,、成功實(shí)驗(yàn)證明

的,。主要適用于各種人體和動(dòng)物組織石蠟切片中總膽固醇的檢測(cè)。廣泛用于組織病理生理的研究,。產(chǎn)品嚴(yán)

格無(wú)菌,，即到即用，操作簡(jiǎn)捷,，性能穩(wěn)定,，熒光清晰。 技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）

的多環(huán)化合物（polycyclic compound）,。其分子式為 cholest-5-en-3β-ol,。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)

合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中,，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝

以及激素合成中起著重要作用,。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene

antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱,。源自于 S. FILIPINENSIS 細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式

為 C35H58O11,，分子量為 654.8,。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉(zhuǎn)化為游離膽固醇,，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物,，產(chǎn)生熒光。由于

石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中,，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分,，因此

使用非二甲苯類脫蠟，以保護(hù)組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關(guān)鍵,。 產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A） 20 毫升

凈化液（Reagent B） 5 毫升

清理液（Reagent C） 20 毫升

水解液（Reagent D） 4 毫升

抗干擾液（Reagent E） 4 毫升

染色液（Reagent F） 2 毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書 1 份

保存方式

保存水解液（Reagent D）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里,，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里,；

有效保證 6 月

用戶自備

熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一,、 脫蠟處理

1． 取出待測(cè)的 6 微米厚的石蠟包埋的組織切片

2． 放進(jìn) 80℃烘箱，孵育 30 分鐘

3． 取出組織切片

4． 小心加上 500 微升脫蠟液（Reagent A）在切片上,，鋪滿整個(gè)切片樣品表面（注意：使用前,，搖勻脫蠟

液）

5． 放進(jìn) 70℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育 5 分鐘

6． 即刻小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）

7． （選擇步驟）重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 2 至 4 一次

8． 小心加上 200 微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

9． 室溫下孵育 2 分鐘

10．小心移去切片上的凈化液（Reagent B）

11．進(jìn)一步依次常規(guī)凈化處理：用戶自備的 100%乙醇,、70%乙醇,、50%乙醇

12．小心加上 200 微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

13．室溫下孵育 3 分鐘

14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）

三,、樣本染色處理

1． 小心加入 200 微升水解液（Reagent C）,，鋪滿整個(gè)樣品表面

2． 室溫下孵育 1 小時(shí)（注意：可以延長(zhǎng)至 4 小時(shí)，避免干枯）

3． 小心移去水解液（Reagent D）

4． 小心加入 200 微升清理液（Reagent C）,，清洗樣品表面

5． 小心移去清理液（Reagent C）

6． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 4 至 5 一次

7． 小心加上 200 微升抗干擾液（Reagent E）,，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

8． 室溫下孵育 10 分鐘

9． 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent E）

10．小心加上 100 微升染色液（Reagent F），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

11．室溫下孵育 30 分鐘,，避免光照

12．小心移去切片上的染色液（Reagent F）

13．小心加上 200 微升清理液（Reagent C）,，清洗樣品表面

14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）

15．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 13 至 14 二次

16．即刻放上蓋玻片或封片

17．在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長(zhǎng)：340nm；散發(fā)波長(zhǎng)：430nm――膽固醇陽(yáng)性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為 20 次操作

2． 操作時(shí),，須戴手套

3． 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片,，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理

2

3

4． 操作時(shí)，避免污染母液

5． 試劑溶液在樣品表面時(shí),，避免有氣泡存在,，同時(shí)確保鋪滿樣品表面

6． 熒光容易受到光漂白（photobleach）,，建議使用抗淬滅劑Ⅰ－12058.2

7． 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察

8． 本公司提供系列組織細(xì)胞膽固醇染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰