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冰凍切片組織線粒體膜通道孔（MPTP）熒光（TMRM）檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
閱讀：1819 發(fā)布時間：2022-11-25
冰凍切片組織線粒體膜通道孔（MPTP）熒光（TMRM）檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
冰凍切片組織線粒體膜通道孔（MPTP）熒光（TMRM）檢測試劑是一種旨在通過四甲基羅丹明甲酯染料，選擇性地聚集在線粒體內(nèi)呈現(xiàn)熒光染色,，一旦釋放到細(xì)胞漿,，其熒光性顯著降低，來分析和觀察線粒體膜通道孔活性經(jīng)典的技術(shù)方法,。該技術(shù)經(jīng)過精心研制,、成功實(shí)驗(yàn)證明的,。其適用于各種冰凍組織線粒體（動物、人體,、昆蟲等）膜通道孔活性的檢測,。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用,，分辨率高,，操作簡捷，性能穩(wěn)定,。
技術(shù)背景
線粒體膜通道孔（mitochondrial permeability transition pore；MPTP）是由線粒體內(nèi)外膜成分構(gòu)成的非特異性且鈣離子依賴性通道,。在細(xì)胞凋亡或壞死時,，線粒體內(nèi)容物通過膜通道孔釋放到胞漿中。線粒體膜電位的去極化（depolarization），導(dǎo)致膜通道孔的開放,，顯著改變線粒體的通透性,，使之線粒體膨脹（swelling），內(nèi)容物釋放,。其中鈣離子過度進(jìn)入,、線粒體谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等導(dǎo)致膜通道孔的持續(xù)開放，而造成細(xì)胞色素C的釋放和線粒體膜電位的消失,。四甲基羅丹明甲酯（tetramethylrhodamine methyl ester,；TMRM），為羅丹明衍生物陽離子染料,，作為電勢測定（potentiometric）熒光探針：第一,，具有親脂性的； 第二,，與線粒體內(nèi)膜負(fù)電極結(jié)合而聚集,；第三，容易進(jìn)入細(xì)胞及其線粒體,。四甲基羅丹明甲酯進(jìn)入細(xì)胞后,，被細(xì)胞內(nèi)酯酶切離，產(chǎn)生四甲基羅丹明,。四甲基羅丹明進(jìn)入線粒體后,，被線粒體俘獲，呈現(xiàn)強(qiáng)烈熒光,。一旦線粒體膜通道孔開放,，四甲基羅丹明釋放出來而在胞漿重新分布，其熒光性顯著降低,。線粒體內(nèi)熒光的變化,，表明膜通道孔的開放狀態(tài)。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 60毫升
染色液（Reagent B） 50微升
稀釋液（Reagent C） 5毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里,，避免光照,；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于染色工作液配制和組織細(xì)胞染色的容器
培養(yǎng)箱：用于染色孵育
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細(xì)胞熒光分析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化,，稀釋液（Reagent C）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出5微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管,，加入500微升稀釋液（Reagent C）,，混勻后，在冰槽里靜置,，并標(biāo)記為染色工作液,，放在暗室里,。然后進(jìn)行下列操作。
1． 準(zhǔn)備5片待測的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
2． 置于室溫下,，小心加上200微升預(yù)冷的清理液（Reagent A）,，鋪滿整個切片表面
3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
4． 小心加上100微升室溫預(yù)熱的染色工作液，鋪滿整個切片表面
5． 在37℃濕潤培養(yǎng)箱里,，孵育30至60分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
6． 小心移去切片上的染色工作液,，避免光照
7． 小心加上500微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
8． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
9． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8一次
10． 放上蓋玻片或封片
11． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察（定性檢測）：激發(fā)波長540nm,，散發(fā)波長580nm――紅色熒光減弱,，表明膜通道孔開放活性（MPTP）增強(qiáng)
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 操作時，避免污染母液
3． 操作時,，須戴手套
4． 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時內(nèi)）制成的冰凍切片
5． 染色前,，所有試劑溶液，除染色液（Reagent B）外,，需37℃預(yù)熱
6． 建議組織染色完成后,，即刻進(jìn)行熒光檢測分析
7． 孵育時，必須避免光照
8． 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
9． 可以使用±10nm波長的濾波器
10． 本公司提供膜通道孔抑制劑： 0.2毫摩爾環(huán)胞素A（cyclosporine A）－12226,，維護(hù)熒光完整
11． 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
使用承諾
本公司秉著“信譽(yù)至上,、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù),。用戶收到貨后,，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,，保證說明書所述的使用效果,。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報告）與本公司聯(lián)系,，并將該產(chǎn)品退回,，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品,。如系使用者錯誤操作所致,，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。