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總抗氧化能力試劑盒說明書
閱讀：1378 發(fā)布時(shí)間：2022-8-19注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究 中常常檢測(cè)血漿,、血清、唾液,、尿液等各種體液,，細(xì)胞或組織等裂解液,、植物或中草藥抽提液 及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。 測(cè)定原理
在酸性環(huán)境下,，物質(zhì)還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映 了其總抗氧化能力,。
自備實(shí)驗(yàn)用品 可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋,、低溫離心機(jī),、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制 提取液：液體 60mL×1 瓶,，使用前預(yù)冷,。 試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存,。 試劑二：液體 5mL×1 瓶,，4℃避光保存。 試劑三：液體 5mL×1 瓶,，避光保存,。
樣品的制備 (1) 血清、血漿,、唾液或尿液樣品 血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃,，5000rpm 離心 10min,，取上清待測(cè)。血清,、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定,，也可以-80℃凍存（不宜超 30 d） 后再測(cè)定。
(2) 組織樣品 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿,，然后 10000g，4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測(cè)。 (3) 細(xì)胞樣品 按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞 加入 1mL 提取液）,，冰浴超聲波破碎（功率 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,；10000g， 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測(cè),。
總抗氧化能力計(jì)算
1. 定義：樣品的抗氧化能力以達(dá)到同樣吸光度變化值（△A）所需的標(biāo)準(zhǔn)液離子濃度表示。 標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y=0.6308 x +0.1291,，R2=0.9989 2. 計(jì)算公式：
(1)按蛋白濃度計(jì)算 總抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣× Cpr） =53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr
(2)按樣品質(zhì)量計(jì)算 總抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W） =53.9×（△ A-0.1291）÷ W (3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 總抗氧化能力（U/104 cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì) 胞數(shù)量（萬個(gè)）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)） (4)按液體體積計(jì)算 總抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反總÷V 樣 =53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr V 樣總：加入提取液體積,，1 mL； V 反總：反應(yīng)總體積,，1.02mL,；V 樣：反應(yīng)中樣品體積， 0.03mL,；W：樣品質(zhì)量,，g；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL
注意事項(xiàng) 1. 試劑二對(duì)人體有刺激性,，請(qǐng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并 戴乳膠手套操
2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑,，否則對(duì)本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生 干擾。
3. 樣品中不宜添加 Tween,、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT,、巰基乙醇等影響氧化還原反 應(yīng)的還原劑。
4. 如果樣品測(cè)定出來的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍以外,，需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進(jìn)行測(cè) 定,。 5. 試劑盒 2-8℃保存。