注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體120ml×1 瓶,，4℃保存,； 試劑一：液體6ml×1 瓶,，4℃保存； 試劑二：液體5ml×1 瓶,，4℃保存,； 試劑三：液體6ml×1 瓶，4℃保存,；

標準品：粉劑10mg×1 瓶（避光）,，4℃保存。（稱取1mg加入10ml提取液,，即為100μg/ml標準品）

試驗中所需的儀器和試劑：

研缽,、冰、低溫離心機,、可見分光光度計,、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水,。

產(chǎn)品說明：

AsA,。AsA 是輔酶、自由基清除劑,、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等,。作為植物細胞中最重要的抗氧化劑，AsA 在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用,， 也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標之一,。

抗壞血酸具有較強還原能力將Fe3+還原成Fe2+，鄰二氮菲與Fe2+會形成紅色螯合物,，在534nm處具

有強的吸收法,，且吸光值與反應液中抗壞血酸含量呈正比。

操作步驟：

一,、樣品的前處理：

(1) 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,， 加入1ml提取液）進行冰浴勻漿。8000g,，4℃離心 20min,，取上清置冰上待測。

(2) 細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（10個）：提取液體積（ul）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細胞加入1ml提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；8000g，4℃離心 20min,，取上清液置冰上混勻待測,。

(3) 血清等液體：按照樣本體積（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1ml 樣本，加入1ml提取液）進行混勻,。8000g,，4℃離心 20min，取上清置冰上待測,。

二,、測定操作表：

1. 分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 534nm,，提取液調(diào)零,。

2. 測定前將所有試劑 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上。

3. 標準曲線的繪制及樣本測定（按順序加入下列試劑）

 

 

充分混勻,，室溫靜置 15min 后，534nm 處測定各管吸光值,。如底部有沉淀,，離心后再讀數(shù)三、抗壞血酸含量計算

根據(jù)標準曲線,，將樣品△A 帶入公式中（x）,，計算出樣品濃度 y（μg/mL）。1.按蛋白濃度計算

抗壞血酸（μg / mg prot）=y×V 樣÷（V 樣×Cpr） 2.按樣本鮮重計算

抗壞血酸（μg /g 鮮重）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) 3.按細胞數(shù)量計算

抗壞血酸（μg /106cell）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量) 4.按體積計算

抗壞血酸（μg /ml）=10y

V 樣總：上清液總體積,，mL,；V 樣：加入反應體系中上清液體積；W：樣品質(zhì)量,，g ,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；細胞數(shù)量：以 106 為單位計量,；T：樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1,、樣品處理需勻漿*,，抗壞血酸易分解，需避光保存

2,、標準品：現(xiàn)配現(xiàn)用,。

3,、若不確定樣品中 抗壞血酸 含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量,。

4,、因為提取液中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,，因此上清液不能用于蛋白濃度測定,。