抗壞血酸含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體120ml×1 瓶,，4℃保存,； 試劑一：液體6ml×1 瓶，4℃保存,； 試劑二：液體5ml×1 瓶,，4℃保存； 試劑三：液體6ml×1 瓶,，4℃保存,；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑10mg×1 瓶（避光），4℃保存,。（稱取1mg加入10ml提取液,，即為100μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品）

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

研缽、冰,、低溫離心機(jī),、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿,、可調(diào)式移液器和蒸餾水,。

產(chǎn)品說(shuō)明：

AsA 。AsA 是輔酶,、自由基清除劑,、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑,，AsA 在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用,， 也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。

抗壞血酸具有較強(qiáng)還原能力將Fe3+還原成Fe2+，鄰二氮菲與Fe2+會(huì)形成紅色螯合物,，在534nm處具

有強(qiáng)的吸收法,，且吸光值與反應(yīng)液中抗壞血酸含量呈正比。

操作步驟：

一,、樣品的前處理：

(1) 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,， 加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,，4℃離心 20min,，取上清置冰上待測(cè)。

(2) 細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10個(gè)）：提取液體積（ul）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時(shí)間3min）；8000g,，4℃離心 20min,，取上清液置冰上混勻待測(cè)。

(3) 血清等液體：按照樣本體積（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1ml 樣本,，加入1ml提取液）進(jìn)行混勻,。8000g，4℃離心 20min,，取上清置冰上待測(cè),。

二、測(cè)定操作表：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 534nm,，提取液調(diào)零。

2. 測(cè)定前將所有試劑 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣本測(cè)定（按順序加入下列試劑）

 

 

 

充分混勻，室溫靜置 15min 后,，534nm 處測(cè)定各管吸光值,。如底部有沉淀，離心后再讀數(shù)三,、抗壞血酸含量計(jì)算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，將樣品△A 帶入公式中（x），計(jì)算出樣品濃度 y（μg/mL）,。1.按蛋白濃度計(jì)算

抗壞血酸（μg / mg prot）=y×V 樣÷（V 樣×Cpr） 2.按樣本鮮重計(jì)算

抗壞血酸（μg /g 鮮重）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) 3.按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

抗壞血酸（μg /106cell）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) 4.按體積計(jì)算

抗壞血酸（μg /ml）=10y

V 樣總：上清液總體積,，mL,；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積；W：樣品質(zhì)量,，g ,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；細(xì)胞數(shù)量：以 106 為單位計(jì)量；T：樣本稀釋倍數(shù),。

注意事項(xiàng)：

1,、樣品處理需勻漿*，抗壞血酸易分解,，需避光保存

2,、標(biāo)準(zhǔn)品：現(xiàn)配現(xiàn)用。

3,、若不確定樣品中 抗壞血酸 含量的高低,，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。

4,、因?yàn)樘崛∫褐泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑,，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。