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技術(shù)文章

超氧化物歧化酶試劑盒的檢測意義

閱讀:1495          發(fā)布時(shí)間:2020-2-20

超氧化物歧化酶試劑盒
測定意義:
SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,,催化超氧化物陰離子 發(fā)生岐化作用,生成 H2O2 和 O2,。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,,也是 H2O2 主要生成 酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用,。
測定原理:
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.),,O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,后者在 560nm 處有吸收,;SOD 可清除 O2-.,,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液藍(lán)色越深,, 說明 SOD 活性愈低,,反之活性越高。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì),、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存,; 
試劑一:15mL×1 瓶,,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,,4℃保存,,用時(shí)加入27ml蒸餾水,充分搖勻懸濁液,;
試劑三:液體 175μL×1 支,,4℃保存;(與蒸餾水1:1稀釋后再使用)
試劑四:液體 10mL×1 瓶,,4℃保存,。
粗酶液提取:
1,、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,,超聲 3s,,間隔 10s,重復(fù) 30 次),; 8000g 4℃離心 10min,,取上清,置冰上待測,。
2,、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),,進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,取上清,,置冰上待測,。
3,、血清(漿)樣品:直接檢測。

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