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高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱
閱讀：1440 發(fā)布時間：2018-1-26ELISA試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要,，細(xì)節(jié)不容忽視,，它是實驗成功的關(guān)鍵與否,；在這
里本司為方便各位了解,，更好的完成實驗，特對高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱做出以
下分析,，供大家參考：
1,、吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡,，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
2,、手工洗板時每次加入洗滌液后,。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一
酶標(biāo)孔中,，防止交叉污染,。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
3,、底物為TMB,，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,，應(yīng)盡量避免接觸皮
膚,。
4、加樣后及時放人孵箱,，標(biāo)本較多時,，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,，防止孵育
時間人為延長,，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*,。
5,、作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,。
6,、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分
鐘后廢棄,。
7,、同批號試劑組分不得混用。
8,、洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。
9,、每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4,。
測量時先用此孔調(diào)OD值至零,。
10、要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)
,，溫度環(huán)境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg,、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣
器都應(yīng)該將其高量程和低量程進(jìn)行確定,。
11、在使用微量加樣器時,，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
12,、檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗,。能熟練操作實驗儀器、器械,，具
有一定總結(jié)和分析問題的能力,，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
13,、操作前仔細(xì)閱讀說明書,，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用
,。值得改進(jìn)的地方,，反復(fù)試驗確定成立后才能改進(jìn)，比如洗板次數(shù)的掌握等,。
14,、評估試劑的實用性,，試劑的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低到頭重要,。在試劑啟用前,，應(yīng)進(jìn)行
陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,，判定試劑符合要求后方可使用,。
15、加樣要準(zhǔn)確,、快速,。加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定,，直接影響顯色結(jié)果,。另外，顯
色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),，所以加樣應(yīng)慎重,。要求在一定時間內(nèi)加
樣完畢的實驗，如果加樣遲緩,，便出現(xiàn)誤差,，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時,，保
存期會縮短甚至失效,。
16、使用校對過的微量移液器,，排除自然誤差,。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要
17,、嚴(yán)格掌握顯色時間,，顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后,，底物結(jié)合物的量過少,，易出
現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,，應(yīng)判為假陽性,，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立
即顯色,，不可報陽性,，這可能是本底顯色的結(jié)果。
18,、洗滌*,，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外,，洗滌液要新鮮,，現(xiàn)用現(xiàn)
配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,，也可能出現(xiàn)假陽性,。
19、嚴(yán)控反應(yīng)時間,，反應(yīng)時間過長,，酶失活；反應(yīng)時間過短,，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物
抗原抗體充分結(jié)合,，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉,，都可能造成假陰性,。
20、ELISA檢測操作步驟復(fù)雜,，可強各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,，才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。
愿以上這些能對您有所幫助,，如果您還有什么疑問,，我司咨詢。