美國耐潔Nalgene 細(xì)胞凍存程序降溫盒 梯度降溫盒 細(xì)胞復(fù)蘇工具 5100-0001介紹：

       貨號(hào)：5100-0001

       用途：細(xì)胞凍存,、細(xì)胞復(fù)蘇

       可放凍存管：1ml、1.2ml,、1.5ml,、2ml

      附：梯度降溫盒使用常見問題（程序降溫盒使用小經(jīng)驗(yàn)）,，程序降溫盒異丙醇使用經(jīng)驗(yàn)    聚碳酸脂（PC）盒體,，藍(lán)色高密度聚乙烯（HDPE）蓋，白色高密度聚乙烯（HDPE）管槽,，泡沫襯墊,。可實(shí)現(xiàn)每分鐘1℃降溫,，大大提高凍存細(xì)胞的存活率,，從冰箱拿出來后，泡沫內(nèi)襯及異丙醇也可保證逐步升溫,，故也可用于細(xì)胞復(fù)蘇,。用之前在盒夾層內(nèi)注入100%濃度的異丙醇，管槽可放置1-2ml凍存管或儲(chǔ)液管18個(gè),，同時(shí)管槽支架可防止管子與酒精接觸,，以防由于毛細(xì)作用而造成污染，或弄掉標(biāo)簽,。

細(xì)胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃,、 -20℃、 -80℃保存,，程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃,，zui后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項(xiàng)如下：

實(shí)驗(yàn)室雖然有程序降溫凍存盒,，但怎么使用一直都搞不明白，我覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時(shí)間(細(xì)胞剛開始還沒凍的時(shí)候就是室溫),，然后把細(xì)胞放進(jìn)去,，再一起移到-80度，這樣才能實(shí)現(xiàn)程序降溫呢? 時(shí)間使用長了,，感覺里面的液體是不是異丙醇啊,，使用時(shí)間長了會(huì)不會(huì)揮發(fā)或變質(zhì)什么的，要不要添加或維護(hù)一下呢,，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分,，要補(bǔ)充嗎?

美國耐潔Nalgene 細(xì)胞凍存程序降溫盒 梯度降溫盒 細(xì)胞復(fù)蘇工具 5100-0001經(jīng)驗(yàn)分享：

經(jīng)驗(yàn)1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于zui底線,。凍存盒肯定是先放在室溫,，然后放進(jìn)去細(xì)胞,，置于-80，利用異丙醇實(shí)現(xiàn)梯度降溫啊,。根據(jù)論壇里的討論,，異丙醇使用過一段時(shí)間后是要更換的，但是我一直沒換過,，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題,。

經(jīng)驗(yàn)2：我們實(shí)驗(yàn)室凍存盒平時(shí)放4度，需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來用就可以了,。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的,。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便,，效果也不錯(cuò)的,。

經(jīng)驗(yàn)3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線,，否則不能起到很好的程序性降溫作用,，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱,，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,，效果很不錯(cuò)。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w,。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤,。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!

經(jīng)驗(yàn)4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因?yàn)樘荻冉禍氐钠鹗键c(diǎn)是室溫20°左右,，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時(shí)間待其恢復(fù)到室溫再使用,。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達(dá)到刻度線,，否則降溫效果會(huì)受到影響,。

經(jīng)驗(yàn)5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上,，理論上是5次以后更換異丙醇,，但是異丙醇對環(huán)境有害，我們可以多用幾次,，只是少了的時(shí)候要加滿,。還有凍存液里面的DMSO對細(xì)胞有毒性，尤其是室溫的時(shí)候，所以凍存盒和凍存液先放4°,，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時(shí)候再拿到-80°里面保存,。過夜再轉(zhuǎn)入液氮,。

程序降溫盒這個(gè)梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯,，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇,。