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產品簡介
人可溶性P選擇素（sP-selectin）ELISA試劑盒實驗過程中需要用到的實驗室器材有標準規(guī)格酶標儀、高速離心機、電熱恒溫培養(yǎng)箱、干凈的試管和Eppendof管,、系列可調節(jié)移液器及吸頭（一次檢測樣品較多時，用多通道移液器）,、蒸餾水和容量瓶等,。
詳細介紹
人可溶性P選擇素（sP-selectin）ELISA試劑盒
英文名稱：Human soluble P-selectin,sP-selectin ELISA KIT
貨號：HD-10176K
性狀：液體
種屬： Human
關鍵詞：人可溶性P選擇素ELISA試劑盒,可溶性P選擇素,ELISA試劑盒
樣本類型： serum, plasma, tissue homogenates
所需樣本體積： 50-100ul
檢測波長： 450 nm
反應時間： 1-5h
人可溶性P選擇素（sP-selectin）ELISA試劑盒操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,，用樣品稀釋液進行稀釋,，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜,，37℃反應120分鐘,。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液,。
2. 棄去液體,，甩干，不用洗滌,。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,，輕輕混勻，在使用前一小時內配制）,，37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔,，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl,，37℃,，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,，棄去孔內液體,，甩干，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干,。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,，底物反應時間到后應盡快加入終止液,。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時,，應將各種試劑管離心數分鐘,，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零,。
3. 為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜,。
4. 未使用完的酶標板或者試劑,，請于2-8℃保存。標準品,、生物素標記抗體工作液,、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品,、生物素標記抗體工作液,、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,，以保證檢測結果的準確性,。
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時,，用多通道移液器
6. 蒸餾水,，容量瓶等
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘,。根據需要,，重復此過程數次,。
自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標）,，OD值為縱坐標（普通坐標）,，在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數,；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數,，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,，避免起泡,。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性,。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數量多，推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高,，請先稀釋后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品,、檢測溶液工作液時,，請以相應的稀釋液配制，不能混淆,。
7. 底物請避光保存,。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。