人鞘氨醇激酶-1（Sphk1）ELISA試劑盒

 使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：                                                          96T

35U/L-1400U/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中鞘氨醇激酶-1（Sphk1）活性,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人鞘氨醇激酶-1（Sphk1）水平,。用純化的人鞘氨醇激酶-1（Sphk1）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入鞘氨醇激酶-1（Sphk1）,，再與HRP標記的鞘氨醇激酶-1（Sphk1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的鞘氨醇激酶-1（Sphk1）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人鞘氨醇激酶-1（Sphk1）活性濃度。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5,。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白孔調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

操作程序總結：

人鞘氨醇激酶-1（Sphk1）ELISA試劑盒計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數,；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數,，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間建議控制在5分鐘內,，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標準曲線,，建議做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔first孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。
• 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6個月