兔SP試劑盒（兔鏈霉卵白素-生物素法檢測(cè)系統(tǒng)）檢驗(yàn)原理：生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG聚合物與結(jié)合在組織片上的一抗反應(yīng)形成免疫復(fù)合物,，辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素與生物素免疫復(fù)合物結(jié)合進(jìn)一步形成聚合物,，聚合物上的辣根酶（HRP）催化顯色底物（DAB或AEC）形成不溶性色原，從而在顯微鏡下顯示出組織片中的特定抗原的位點(diǎn),。

存儲(chǔ)條件：	2~8℃暗處保存,。
檢驗(yàn)原理：	生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG聚合物與結(jié)合在組織片上的一抗反應(yīng)形成免疫復(fù)合物，辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素與生物素免疫復(fù)合物結(jié)合進(jìn)一步形成聚合物,，聚合物上的辣根酶（HRP）催化顯色底物（DAB或AEC）形成不溶性色原,，從而在顯微鏡下顯示出組織片中的特定抗原的位點(diǎn)。
試劑盒內(nèi)容：	包裝規(guī)格： 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 試劑1：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 試劑2：封閉用正常山羊血清工作液 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 試劑3：生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 試劑4：辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL
檢驗(yàn)方法：	1,、檢驗(yàn)所需儀器,、設(shè)備：移液器、恒溫箱,、修復(fù)儀、免疫組化筆,、計(jì)時(shí)器,、孵育盒、染色架,、蓋玻片,、光學(xué)顯微鏡、洗瓶,。 2,、試劑準(zhǔn)備：DAB顯色液需要在使用前配制。  3,、操作程序：  a) 脫蠟和水化 石蠟切片置于新鮮二甲苯中,，浸泡10分鐘×3次；去除多余的液體后,，置于無水乙醇中,，浸泡3分鐘×3次；去除多余的液體后,，置于95%乙醇中,，浸泡3分鐘×2次；去除多余的液體后,，置于75%乙醇中,，浸泡3分鐘×2次；蒸餾水沖洗1分鐘,，置于PBS緩沖液中,。 b) 抗原修復(fù)，參見一抗說明書,。 c) 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶 加入適量的內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑,，室溫孵育10分鐘,；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 d) 滴加封閉用正常山羊血清工作液 滴加100μL或適量的封閉用正常山羊血清工作液,，室溫孵育10~15分鐘,，傾去血清，勿洗,。 e) 滴加一抗 根據(jù)組織大小,，滴加100μL或適量的一抗，37℃孵育60分鐘,；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次,。 f) 滴加生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物 滴加100μL或適量的生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物，室溫孵育10~15分鐘,；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次,。 g) 滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液 滴加100μL或適量的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育10~15分鐘,；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次,。 h) 顯色 加入適量新鮮配制的DAB或AEC顯色液，室溫孵育5～8分鐘,。 i) 復(fù)染 自來水沖洗,，蘇木素染色液孵育20秒；分化,、沖洗返藍(lán),。 j) 脫水、透明,、封片 k) 閱片,。 4、結(jié)果判定,，染色結(jié)果須由有資質(zhì)的病理醫(yī)生對(duì)染色后的組織片在光學(xué)顯微鏡下觀察并進(jìn)行判讀,。
檢驗(yàn)結(jié)果的解釋：	1、抗原修復(fù),、孵育時(shí)間,、溫度的修改或使用其他方法均有可能得出錯(cuò)誤結(jié)果。 2,、在每一次染色過程中,，必須有空白對(duì)照和陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。 3,、如果陽性組織對(duì)照不能顯示適當(dāng)?shù)年栃匀旧?，?yīng)判定該批次樣本的檢測(cè)結(jié)果無效。 4、若生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物和辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液孵育溫度過高或孵育時(shí)間過長(zhǎng),，可能導(dǎo)致染色過強(qiáng)及背景染色,。
檢驗(yàn)方法的局限性：	1、免疫組織化學(xué)染色是一種需通過多個(gè)操作步驟完成的檢測(cè)過程,。在組織前期處理和實(shí)驗(yàn)過程中的不規(guī)范操作,，有可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 2,、專業(yè)的操作人員,、經(jīng)過認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室和標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)流程，可以減少各種外界因素造成的操作偏差,。 3,、紅細(xì)胞和細(xì)胞色素 C可能會(huì)造成假陽性結(jié)果。 4,、某些組織中內(nèi)源性生物素含量比較高,，可能導(dǎo)致染色過強(qiáng)及背景染色。 5,、陰性結(jié)果表示未檢出抗原,，不一定表示樣本中無該抗原存在。待測(cè)抗原編碼基因變異,、抗原低表達(dá)或抗原修復(fù)不當(dāng)?shù)?，都?huì)造成抗原無法檢出,。 6,、本試劑僅對(duì)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進(jìn)行了驗(yàn)證，不作其他用途,。
產(chǎn)品性能指標(biāo)：	1,、裝量：試劑盒各組份的溶液裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量。 2,、符合性：取符合性組織片（包括陽性組織對(duì)照和陰性組織對(duì)照）,，經(jīng)相應(yīng)的免疫組化實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)陽性著色定位準(zhǔn)確,，且無背景染色,；同時(shí)，空白對(duì)照和陰性對(duì)照染色結(jié)果為陰性,。 3,、批內(nèi)重復(fù)性：取同一批次的試劑盒，檢測(cè)組織片3片,，染色強(qiáng)度和定位無明顯差異,。
標(biāo)本染色：	1. 石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水,。 2. 如需采用抗原修復(fù),，在此步驟后進(jìn)行,。 3. 3% H2O2去離子水（無色液體）孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性,。PBS沖洗,，3分鐘 3次。 4. 滴加試劑A（藍(lán)色液體）室溫孵育10~15分鐘,，傾去,，勿洗。 5. 滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜,。 6. PBS沖洗，3分鐘 3次,。 7. 滴加試劑B（黃色液體）室溫或37℃孵育10~15分鐘,。 8. PBS沖洗，3分鐘 3次,。 9. 滴加試劑C（橙色液體）,，室溫或37℃孵育10~15分鐘。 10. PBS沖洗,，3分鐘 3次,。 11. 顯色劑顯色（DAB或AEC）。 12. 自來水充分沖洗,。 13. 如果需要,，可進(jìn)行復(fù)染，脫水,，透明,。 14. 選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>