牛細(xì)螺旋體病毒（LEP）elisa試劑盒免費(fèi)代測(cè)

l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清,、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中牛細(xì)螺旋體病毒（LEP）的含量,。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被牛細(xì)螺旋體病毒（LEP）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的牛細(xì)螺旋體病毒（LEP）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

牛細(xì)螺旋體病毒（LEP）elisa試劑盒免費(fèi)代測(cè)類型
　　ELISA可用于測(cè)定抗原,，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體,，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）,；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）,；（3）酶反應(yīng)的底物,。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件,，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。用于臨床檢驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類型：

捕獲包被法測(cè)抗體

　　IgM抗體的檢測(cè)用于傳染病的早期診斷中,。間接法ELISA一般僅適用于檢測(cè)總抗體或IgG抗體,。如用抗原包被的間接法直接測(cè)定IgM抗體，因標(biāo)本中一般同時(shí)存在較高濃度的IgG抗體,，后者將競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結(jié)合到固相上,。因此如用抗人IgM作為二抗，間接測(cè)定IgM抗體,，必須先將標(biāo)本用A蛋白或抗IgG抗體處理,，以除去IgG的干擾。在臨床檢驗(yàn)中測(cè)定抗體IgM時(shí)多采用捕獲包被法,。先用抗人IgM抗體包被固相,，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對(duì)抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原,，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合,。繼而加酶標(biāo)記針對(duì)抗原的特異性抗體。再與底物作用,，呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān),。此法常用于病毒性感染的早期診斷。甲型肝炎病毒（HAV）抗體的檢測(cè)模式見圖,。
　　類風(fēng)濕因子（RF）同樣能干擾捕獲包被法測(cè)定IgM抗體,，導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。因此中和IgG的間接法近來(lái)頗受青睞,，用這類試劑檢測(cè)抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功,。

操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析
1,、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線，樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

保存方法
1）血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2）血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑的準(zhǔn)備
1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

標(biāo)本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過(guò)高的陰性本底影響結(jié)果的判斷,。

代檢測(cè)服務(wù)

購(gòu)買本公司目錄任何一種檢測(cè)試劑盒,，都可提供代檢測(cè)服務(wù)，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Mon key, Pig……)種類和檢測(cè)指標(biāo)(介素類,、因子類)及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)通知公司業(yè)務(wù)員即可,。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中,！

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