豬一氧化氮（NO）ELISA試劑盒技術指導

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關液體樣本中豬一氧化氮（NO）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被豬一氧化氮（NO）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬一氧化氮（NO）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

豬一氧化氮（NO）ELISA試劑盒技術指導主要優(yōu)點

 1.高效,、靈敏,、特異的抗體；

 2. 穩(wěn)定的重復性和可靠性,；

 3. 吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；

 4. 適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標本類型；

 5. zui大限度的節(jié)省實驗經(jīng)費,。

常用的使用方法

一,、雙抗體夾心法測定抗原

將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

加抗原,，形成抗原-抗體復合物;

加抗原免疫第二種動物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復合物;

加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體);

加底物,。底物的降解量＝抗原量,。

二、直接法測定抗原

將抗原吸附在載體表面,；

加酶標抗體,，形成抗原—抗體復合物；

加底物,。底物的降解量＝抗原量,。

三、間接法測定抗體

將抗原吸附于固相載體表面,；

加抗體, 形成抗原-抗體復合物,；

加酶標抗體；

加底物,。 測定底物的降解量＝抗體量,。

問題解答

靈敏度是什么意思？

根據(jù)我司多年來的銷售經(jīng)驗,，我司了解到客戶針對購買Elisa試劑盒時,，靈敏度要求非常高。這是為什么呢,？為您解析Elisa試劑盒靈敏度,。Elisa試劑盒靈敏度高能使產(chǎn)品達到一定的數(shù)值，對產(chǎn)品試驗有著非常大利益,，它能檢測到的分析物的zui小量,，表示檢測下限的能力。

相對靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%

測定方法及表示方法：靈敏度標準品,、質控血清,、陽性標本稀釋終點、血清盤（pannel）及臨床標本陽性率,。

靈敏度標準品可以從衛(wèi)生部臨檢中心購買,，質控血清可以從衛(wèi)生部臨檢中心購買，也可以自己配制,。因為質控血清不一定是原倍血清,，或由于片段、亞型,、位點等原因,，評定試劑盒的靈敏度都帶有一定的片面性。

陽性標本稀釋終點的方法常用于不同試劑盒的比較,，但也有上述的片面性,。陽性pannel有些可以從衛(wèi)生部臨檢中心購買,，如HBsAg陽性pannel，也可以自己配制,。臨床標本陽性率,，是一種粗略的估計，但對臨床很實用,。

注意事項

1. 由于產(chǎn)品底物顯色劑對光及其敏感,，因此要避光保存。

2. 檢測吸光度前應將酶標儀打開,，將其預熱30min以上,。

3. 孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。

4. 要盡量做雙孔實驗,，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性，又能反映出試劑盒的精密度,。

5. 對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證,。

結果計算：

在半對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線。標準品的濃度為X軸,，相應的OD值為Y軸,，用四參數(shù)或對數(shù)-對數(shù)法繪制zui合適的標準曲線。濃度與OD值成反比關系,，隨著標準品濃度的增加,，黃色強度就減少，即OD值減少樣本濃度可直接從標準曲線上讀取,。如果樣本實驗前進行了稀釋,，則試劑盒zui后結果應乘以相應的稀釋因子標準曲線為逆向S型曲線。

附：采用全自動酶標儀檢測,，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數(shù),，如坐標參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸,、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程）,，即可直接得到結果。

產(chǎn)品名稱存放：收到貨后貯存于4℃,，強烈建議盡快使用配制的試劑1X緩沖液貯存于4℃,，將不用的微孔板放回至密封袋內密封起來，貯存于4℃,，已稀釋的標準品,，生物標記物，抗體和HRP貯存于4℃,。