一,、產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    運(yùn)輸環(huán)境和儲(chǔ)存環(huán)境溫度為2-8℃,，避免熱源或太陽(yáng)直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述,。開封的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定,，前提是將試劑盒用袋子密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。

二,、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要用到的器材

1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,；

2.高速離心機(jī)；

3.電熱恒溫培養(yǎng)箱,；

4.干凈的試管和Eppendof管,；

5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí),，用多通道移液器,；

6.蒸餾水，容量瓶等,。

三,、“BIM人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒”操作方法：

    各種類型ELISA測(cè)定時(shí)一般需經(jīng)過(guò)這些步驟：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。

1.按說(shuō)明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑,。

2.ELISA試劑盒中用的蒸餾水或去離子水,，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,。

3.從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用,。

4.試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存,。

四、ELISA結(jié)果處理

    1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔,，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值,，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。

　　2.平均OD值減去空白孔的OD值,。

　　3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸,，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法,。建議使用合適的軟件來(lái)作圖，比如CurveExpert 1.4,。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線,、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù),、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程,。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù),，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程,，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%),。選擇擬合度zui高的那條曲線,。

五、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的常見問題
1. 問--客戶用48T試劑盒,，大概只有十個(gè)樣所以他一次用不完那么多板條,，但是他想做兩次，可封板膜只有一張,，那如果用完了怎么辦,？可以用什么別的東西取代嗎？
答--可以把封板膜剪掉,，用多少剪多少也可以用封口膜替代,。
2. 問--實(shí)驗(yàn)過(guò)程中溫育是放在哪溫育呢？
答--可以在水浴箱,、細(xì)胞培養(yǎng)箱和烘干箱里面都行,，只要恒定溫度為37度。

六,、“BIM人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒”注意事項(xiàng)
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在 4 ℃ 備用,，如有特殊 原因需要周期收集標(biāo)本,， 
將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存,。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時(shí),， -20 ℃ 可保存 1 個(gè)月,。 -70 度可保存 6 個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶,。
液體類標(biāo)本： 
標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀。包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等,。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝ 100ul × 檢測(cè)種類。取材前須向銷售人員索要說(shuō)明書,。
血清： 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
血漿： 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA ,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,，應(yīng)再次離心,。
尿液、胸腹水,、腦脊液： 
用無(wú)菌管收集,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清： 
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí),，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 
釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) /ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本： 
切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）,。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 
漿充分,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用,。