一,、產(chǎn)品簡介：

【產(chǎn)品名稱】：雞硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：96T 48T

產(chǎn)品品牌：滬鼎生物 

樣品類型  血清,、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣品類型

檢測方法  酶聯(lián)免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性

交叉反應(yīng)  由于當(dāng)前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識有限,，現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物,。因此，交叉反應(yīng)可能仍然存在

樣 本 量  50-100 μL

實(shí)驗(yàn)時(shí)間  1–4.5h

儲存條件  2-8°C

儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達(dá)1個(gè)月（專家建議：4°C恒溫保存,，酶免試劑盒實(shí)驗(yàn)效果更佳）,。對于長期存儲,請?jiān)?20°C的存儲。盡量保持試驗(yàn)板在密封鋁箔袋,，避免潮濕

有 效 期  6 months

使用優(yōu)點(diǎn)  ELISA試劑盒可特異性定量測定疾病相關(guān)蛋白,，包括細(xì)胞因子、趨化因子,、β淀粉樣蛋白與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)靶標(biāo),。

■靈敏，準(zhǔn)確和*的性能

■用血清,、血漿,、組織培養(yǎng)上清或裂解產(chǎn)物進(jìn)行過驗(yàn)證

■在半天內(nèi)可完成的現(xiàn)成，方便的檢測

二,、實(shí)驗(yàn)原理：
   用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化的抗該指標(biāo)抗體,、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),，計(jì)算樣品濃度。
三．ELISA常用的幾種方法：
1,、雙抗體夾心法測定抗原
將抗原免疫*種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原,，形成抗原-抗體復(fù)合物; 
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體); 
加底物。底物的降解量＝抗原量,。
2,、直接法測定抗原 
將抗原吸附在載體表面,；
加酶標(biāo)抗體,，形成抗原—抗體復(fù)合物；
加底物,。底物的降解量＝抗原量,。 
3、間接法測定抗體
將抗原吸附于固相載體表面,；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物,；
加酶標(biāo)抗體；
加底物,。 測定底物的降解量＝抗體量,。

四．“雞硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒”樣品收集、處理及保存：
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
2）細(xì)胞：
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測,。
3）血清：
在室溫下,，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測,。
4）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
5）體液：
包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。
6.）組織標(biāo)本：
切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進(jìn)行檢測。
樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
五．操作步驟：
1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）,、空白孔,、待測樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只,，依次編好號碼,，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品,。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔,。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次,，拍干,。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）,。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干,。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液,。
12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),，以免影響準(zhǔn)確性。

六.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法：
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,，我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例,，繪制的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：

七．?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，即為樣品的實(shí)際濃度。
八．“雞硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒”必知項(xiàng)：
1. 水溶性,、低黏度,、無腐蝕、不易燃,、*,。
2. 所采用的方法特異性好，靈敏度,、準(zhǔn)確度,、精密度。
3. 所用標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)參考物符合推薦標(biāo)準(zhǔn)和要求,。
4. 貯存期至少為1年,。

九.配送服務(wù)：

    產(chǎn)品包裝：在采樣、發(fā)送,、運(yùn)輸過程中有保冷溫度要求的,，公司均采用加厚款生物保溫箱，內(nèi)裝生物冰袋,，有效的控制產(chǎn)品溫度,，保證貨物質(zhì)量不受影響，同時(shí)并填充大量EPE發(fā)泡棉,，具有*的緩沖彈性,，它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護(hù)在郵寄物品周圍，它能有效的吸收嚴(yán)酷的沖擊力,，使郵寄物品免于破損,，保證貨物完好送達(dá)您手。

物流快遞：鑒于各快遞在全國各地承諾超配送范圍與全國行政區(qū)劃分有較大差異,，以及快遞會(huì)對其配送范圍內(nèi)進(jìn)行不定期調(diào)整,，我們目前無法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定位，但我們會(huì)盡力協(xié)助您解決問題,。 同時(shí)我們還為為上海市本地客戶可提供送貨上門服務(wù),，1個(gè)工作日送達(dá)。我司承諾,，保障大家的貨物*時(shí)間寄送,，為大家提供快速,、準(zhǔn)確、安全,、優(yōu)質(zhì)的配送服務(wù),。