一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

【產(chǎn)品名稱】：雞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒 

產(chǎn)品規(guī)格：96T 48T

產(chǎn)品品牌：滬鼎生物 TSZ

樣品類型  血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣品類型

檢測(cè)方法  酶聯(lián)免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性

交叉反應(yīng)  由于當(dāng)前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識(shí)有限，現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測(cè)的靶抗原之間和所有其他物種的類似物,。因此,，交叉反應(yīng)可能仍然存在

樣 本 量  50-100 μL

實(shí)驗(yàn)時(shí)間  1–4.5h

儲(chǔ)存條件  2-8°C

儲(chǔ)存方法  可以存儲(chǔ)在2 - 8°C長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實(shí)驗(yàn)效果更佳）,。對(duì)于長(zhǎng)期存儲(chǔ),請(qǐng)?jiān)?20°C的存儲(chǔ),。盡量保持試驗(yàn)板在密封鋁箔袋，避免潮濕

有 效 期  6 months

使用優(yōu)點(diǎn)  ELISA試劑盒可特異性定量測(cè)定疾病相關(guān)蛋白,，包括細(xì)胞因子,、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)靶標(biāo),。

■靈敏,，準(zhǔn)確和*的性能

■用血清、血漿,、組織培養(yǎng)上清或裂解產(chǎn)物進(jìn)行過驗(yàn)證

■在半天內(nèi)可完成的現(xiàn)成,，方便的檢測(cè)

二、實(shí)驗(yàn)原理：
   用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),，計(jì)算樣品濃度,。
三．實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器,、吸頭,、蒸餾水或去離子水，濾紙,。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用,。
四．“雞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒”樣品收集,、處理及保存：
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
2）細(xì)胞：
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè)。
3）血清：
在室溫下,，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè),。
4）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
5）體液：
包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
6.）組織標(biāo)本：
切取組織標(biāo)本,，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè),。
樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測(cè),，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
五．操作步驟：
1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）,、空白孔,、待測(cè)樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只,，依次編好號(hào)碼,，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻；然后在該試管中取100ul,，棄掉,。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差,，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去,，如此重復(fù)5 次，拍干,。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí),。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板5次,，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul,。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液,。
12）讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值,。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),，以免影響準(zhǔn)確性,。

六.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法：
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例,，繪制的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：

七．?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度,。
八．“雞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒”注意事項(xiàng)：
1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染。
2）加樣：加樣時(shí),，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。
3）孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行,。
反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。
4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高,，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
5）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個(gè)標(biāo)本）,，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購(gòu)經(jīng)銷商,，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。

九.配送服務(wù)：

產(chǎn)品包裝：在采樣,、發(fā)送、運(yùn)輸過程中有保冷溫度要求的,，公司均采用加厚款生物保溫箱,，內(nèi)裝生物冰袋，有效的控制產(chǎn)品溫度,，保證貨物質(zhì)量不受影響,，同時(shí)并填充大量EPE發(fā)泡棉，具有*的緩沖彈性,，它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護(hù)在郵寄物品周圍,，它能有效的吸收嚴(yán)酷的沖擊力，使郵寄物品免于破損,，保證貨物完好送達(dá)您手,。

物流快遞：鑒于各快遞在全國(guó)各地承諾超配送范圍與全國(guó)行政區(qū)劃分有較大差異，以及快遞會(huì)對(duì)其配送范圍內(nèi)進(jìn)行不定期調(diào)整,，我們目前無法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定位,，但我們會(huì)盡力協(xié)助您解決問題。 同時(shí)我們還為為上海市本地客戶可提供送貨上門服務(wù),，1個(gè)工作日送達(dá),。我司承諾，保障大家的貨物*時(shí)間寄送,，為大家提供快速,、準(zhǔn)確、安全、優(yōu)質(zhì)的配送服務(wù),。