一、產品簡介：

【產品名稱】：雞可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒

產品規(guī)格：96T 48T

產品品牌：滬鼎生物 TSZ

樣品類型  血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清等樣品類型

檢測方法  酶聯(lián)免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性

交叉反應  由于當前的酶聯(lián)免疫科學技術和知識有限，現(xiàn)有技術不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物,。因此,，交叉反應可能仍然存在

樣 本 量  50-100 μL

實驗時間  1–4.5h

儲存條件  2-8°C

儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達1個月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實驗效果更佳）,。對于長期存儲,請在-20°C的存儲,。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕

有 效 期  6 months

使用優(yōu)點  ELISA試劑盒可特異性定量測定疾病相關蛋白,，包括細胞因子,、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號轉導靶標,。

■靈敏,，準確和*的性能

■用血清、血漿,、組織培養(yǎng)上清或裂解產物進行過驗證

■在半天內可完成的現(xiàn)成,，方便的檢測

二、實驗原理：
   用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體,、HRP標記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度,。
三．實驗材料與試劑配制：
1.儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘）,，微量加液器、吸頭,、蒸餾水或去離子水,，濾紙。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用,。
四．“雞可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒”樣品收集,、處理及保存：
1）.細胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
2）細胞：
用PBS反復洗滌細胞3次,，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份,，或者細胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測。
3）血清：
在室溫下,，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測,。
4）血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
5）體液：
包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
6.）組織標本：
切取組織標本,，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測，應將其分裝,，-70 ℃保存,，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心,。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
五．操作步驟：
1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設標準品組（6個濃度）,、空白孔,、待測樣品組。
3）標準品的稀釋：準備小試管6 只,，依次編好號碼,，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻；然后在該試管中取100ul,，棄掉,。第六只試管作為0 號標準品,。
注：為減少實驗誤差，保證準確性,，建議設置復孔,。
4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去,，如此重復5 次，拍干,。
7）加酶標溶液：標準品組,、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。
8）溫育：酶標板用封板紙密封后,，放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時,。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s,，充分清洗酶標板5次,，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul,。
11）終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液,。
12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值,。
注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內,，以免影響準確性,。

六.標準曲線的繪制方法：
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線,，我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例,，繪制的ELISA標準曲線如下：

七．數(shù)據(jù)計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，即為樣品的實際濃度。
八．“雞可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒”注意事項：
1）實驗操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染,。
2）加樣：加樣時，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大,，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性,。
3）孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行,。
反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,。
4）建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高,，應對樣品進行稀釋,，計算結果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
5）建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線,，試用幾個標本）,，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商,，如果因運輸過程導致試劑盒失效,，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失,。

九.配送服務：

產品包裝：在采樣,、發(fā)送、運輸過程中有保冷溫度要求的,，公司均采用加厚款生物保溫箱,，內裝生物冰袋，有效的控制產品溫度,，保證貨物質量不受影響,，同時并填充大量EPE發(fā)泡棉，具有*的緩沖彈性,，它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護在郵寄物品周圍,，它能有效的吸收嚴酷的沖擊力，使郵寄物品免于破損，保證貨物完好送達您手,。

物流快遞：鑒于各快遞在全國各地承諾超配送范圍與全國行政區(qū)劃分有較大差異,，以及快遞會對其配送范圍內進行不定期調整，我們目前無法實現(xiàn)準確定位,，但我們會盡力協(xié)助您解決問題,。 同時我們還為為上海市本地客戶可提供送貨上門服務，1個工作日送達,。我司承諾,，保障大家的貨物*時間寄送，為大家提供快速,、準確,、安全、優(yōu)質的配送服務,。