一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

【產(chǎn)品名稱】：雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 

【檢測(cè)方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

【產(chǎn)品性狀】：96T/48T,，盒裝液體(兩種統(tǒng)一規(guī)格)

【貯藏條件】：2-8°C

【有 效 期】：二年,，我公司Elisa試劑盒均為批次，可放心購(gòu)買,。

【主要成分】：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等,。

【種    屬】馬鈴薯、鹿,、羊,、雞、鴨,、魚,、人、大鼠,、小鼠,、豚鼠、倉(cāng)鼠,、裸鼠,、兔子、豬,、犬,、猴、馬,、牛等動(dòng)植物,。

【產(chǎn)品單價(jià)】（ELISA試劑盒具體折扣），可免費(fèi)代測(cè),，含稅含運(yùn)費(fèi),。

【標(biāo)    本】血清、血漿,、細(xì)胞上清液,、尿液、體液,、灌洗液,、腦脊髓、心房水、胸房水,、組織等

注：標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀。

二,、實(shí)驗(yàn)原理：
    ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。
三．實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘）,，微量加液器、吸頭,、蒸餾水或去離子水,，濾紙。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用,。
四．“雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 ”樣品收集,、處理及保存
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
2）細(xì)胞：
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè)。
3）血清：
在室溫下,，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。
4）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
5）體液：
包括胸腹水,、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
6.）組織標(biāo)本：
切取組織標(biāo)本,，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進(jìn)行檢測(cè),。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測(cè),，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
五．操作步驟：
1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘,。
2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔,、待測(cè)樣品組,。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只,，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻,；然后在該試管中取100ul,，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差,，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔,。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去,，如此重復(fù)5 次，拍干,。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí),。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板5次,，用吸水紙*拍干,。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul,。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液。
12）讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值,。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性,。

六.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法：
可以采用各種繪圖軟件來(lái)繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,，我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例，繪制的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：

七．?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，即為樣品的實(shí)際濃度,。
八．“雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 ”注意事項(xiàng)：
1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染,。
2）加樣：加樣時(shí),，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3）孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行,。
反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。
4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。
5）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本）,，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,，可和所購(gòu)經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換,，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。

九.配送服務(wù)：

產(chǎn)品包裝：在采樣、發(fā)送,、運(yùn)輸過(guò)程中有保冷溫度要求的,，公司均采用加厚款生物保溫箱，內(nèi)裝生物冰袋,，有效的控制產(chǎn)品溫度,，保證貨物質(zhì)量不受影響，同時(shí)并填充大量EPE發(fā)泡棉,，具有*的緩沖彈性,，它就像成千上萬(wàn)的小彈簧緊緊地保護(hù)在郵寄物品周圍，它能有效的吸收嚴(yán)酷的沖擊力,，使郵寄物品免于破損,，保證貨物完好送達(dá)您手。

物流快遞：鑒于各快遞在全國(guó)各地承諾超配送范圍與全國(guó)行政區(qū)劃分有較大差異,，以及快遞會(huì)對(duì)其配送范圍內(nèi)進(jìn)行不定期調(diào)整,，我們目前無(wú)法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定位，但我們會(huì)盡力協(xié)助您解決問題,。 同時(shí)我們還為為上海市本地客戶可提供送貨上門服務(wù),，1個(gè)工作日送達(dá)。我司承諾,，保障大家的貨物*時(shí)間寄送,，為大家提供快速、準(zhǔn)確,、安全、優(yōu)質(zhì)的配送服務(wù),。