一,、性能參數(shù)

    使用前*閱讀說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,，只能用于研究用途,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

二,、“豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒”工作原理  

   所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ELISA）,。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體,，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記,。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌,。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng),；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。

三,、每套試劑盒中內(nèi)容(96T)

材料 數(shù)量

標(biāo)準(zhǔn)品 96T(2vial)

預(yù)包被抗體的96孔板 96T（8×12）

生物素標(biāo)記人ANG抗體 96T (1:100)

ABC（親和素-過氧化物酶復(fù)合物） 96T (1:100)

樣品稀釋液 96T×2

抗體稀釋液 96T×1

ABC稀釋液 96T×1

TMB顯色液A 96T×1

TMB顯色液B 96T×1

TMB終止液 96T×1

ELISA洗滌液 96T×1(1:25)

四,、需要而未提供的試劑和器材

1． 37℃恒溫箱。

2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。

3． 自動(dòng)洗板機(jī),。

4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。

5． 蒸餾水,，容量瓶等

6． 干凈的試管和Eppendof管,。

五、“豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒”注意事項(xiàng)

1. 從-20℃取出的試劑盒,，在4℃解凍guoye,。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時(shí)出現(xiàn)的分層,，否則會(huì)出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象,。

2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。

3. 配制各種試劑時(shí),，切記混勻,！

4. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,，以便試劑集中到管底,。

5. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本都做雙份檢測(cè)。

6. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥,。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活,！

7. 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管,。

六,、洗板方法

    手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中,。

七、樣品的準(zhǔn)備和保存

    樣品如果不立即分析,，應(yīng)分裝后冷凍保存,，且避免反復(fù)凍融。

血清——用干凈試管收集血液,，室溫凝固2小時(shí)或4℃guoye,，離心1000×g 10分鐘，收集血清,。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存,。

細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿,、體液——離心去除沉淀,，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

八,、樣品稀釋的一般原則

    用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測(cè)因子的含量,，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測(cè)范圍,。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

九,、標(biāo)本的采集及保存

1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃guo夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè),，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍,。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月,，-80℃不應(yīng)超過2個(gè)月,；標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。

十,、操作程序

1． 確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。

2． 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照,。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。

3． 酶標(biāo)板加上蓋,，37℃反應(yīng)90分鐘,。

4． 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,，再對(duì)著吸水紙拍幾下,。洗滌2次。

5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應(yīng)60分鐘,。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右,。

7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應(yīng)30分鐘。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,，每次浸泡1-2分鐘左右,。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng),，反應(yīng)過程中,，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,，后3-4孔差別不明顯時(shí),，即可加入TMB終止液0.1ml/孔,。（顯色反應(yīng)zui長(zhǎng)不要超過30分鐘）。

10． 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值,。

11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度,。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N,。

十一、“豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒”計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量

【特異性】： 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng),。

【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃

【有效期】： 12個(gè)月（-777℃）,。

【用途】： 用給我留言于體外定量分析液體標(biāo)本（通用型）

本試劑盒經(jīng)過充分驗(yàn)證，保證有效且重復(fù)性佳,。歡迎我司業(yè)務(wù)員查詢價(jià)格及優(yōu)惠信息,。