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詳細(xì)介紹
一,、“豬角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒”實(shí)驗(yàn)原理：
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
二,、ELISA常用的幾種方法：
1,、雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫*種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);
加底物,。底物的降解量＝抗原量。
2,、直接法測(cè)定抗原
將抗原吸附在載體表面,；
加酶標(biāo)抗體,，形成抗原—抗體復(fù)合物；
加底物,。底物的降解量＝抗原量,。
3、間接法測(cè)定抗體
將抗原吸附于固相載體表面,；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物,；
加酶標(biāo)抗體；
加底物,。 測(cè)定底物的降解量＝抗體量,。
三、“豬角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒”操作注意事項(xiàng)：
1.試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對(duì)照或者空白；預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋,，直接取10μL加樣即可,。
4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。
5.所有液體組分使用前充分搖勻,。
四、elisa試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題：
1.產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格,？可檢測(cè)多少個(gè)樣本,？
產(chǎn)品分為48T和96T兩種規(guī)格。 每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度,，加上空白孔,，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔。因此,，一個(gè)48T試劑盒zui多可以測(cè)定40個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完）,，一個(gè)96T試劑盒zui多可以測(cè)定88個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完）?？梢愿鶕?jù)實(shí)際樣本數(shù)量和實(shí)驗(yàn)計(jì)劃選擇合適的產(chǎn)品規(guī)格,。
2.48T和96T的試劑盒有哪些不同？
48T和96T的試劑盒，每個(gè)孔的反應(yīng)體系都是*一樣的,。不同的是試劑盒中各組分的規(guī)格，詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū),。
3.產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何,？
產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過(guò)嚴(yán)格的穩(wěn)定測(cè)試，發(fā)貨前亦須通過(guò)檢測(cè)并提供質(zhì)檢報(bào)告,，在市場(chǎng)上深受廣大客戶的贊許,！
五、洗板方法：
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次,。
2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5次,。
六、操作步驟：
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；
4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
七,、結(jié)果判斷：
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中,，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,，按曲線方程計(jì)算各樣
八、“豬角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒”試劑盒性能：
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。
2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0pg/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。
4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
6. 有效期：6個(gè)月
免責(zé)聲明：
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé),。
2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。
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