一．“豬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒”實驗原理：

    ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性。在測定時,，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

二,、ELISA常用的幾種方法：
1,、雙抗體夾心法測定抗原
將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物; 
加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動物抗體的抗體); 
加底物,。底物的降解量＝抗原量。
2,、直接法測定抗原 
將抗原吸附在載體表面,；
加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物,；
加底物。底物的降解量＝抗原量,。 
3,、間接法測定抗體
將抗原吸附于固相載體表面；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物,；
加酶標(biāo)抗體,；
加底物。 測定底物的降解量＝抗體量,。

三,、“豬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒”操作注意事項：

1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。

2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白,；預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可,。

4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻,。

四,、試劑盒組成：

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：120、60,、30,、15、7.5、3.75pg/mL

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

五、洗板方法：

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次,。

2.自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5次,。

六、操作步驟：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；

4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

七,、結(jié)果判斷：

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣

八、“豬免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒”試劑盒性能：

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。

2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4.  重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

6.  有效期：6個月

免責(zé)聲明：

1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé),。

2.嚴(yán)格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān),。