中文名稱：豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。

規(guī)格：96T/48T

性狀：液體

保存：2-8℃

有效期：6個月

“豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒”實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),，計算樣品濃度,。

操作說明

1．試劑盒保存：-20℃(較長時間不用時)；2-8℃(頻繁使用時),。

2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3．中,、英文說明書可能會有不*之處,，請以英文說明書為準(zhǔn)。

4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。

試劑盒組成

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

溫育：操作同3。

洗滌：操作同5,。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

試劑盒說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染,，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果,。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時,，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間,，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果,。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃,，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),。
4. 濃洗滌液會有鹽析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象,，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中,、英文說明書可能會有不*之處,，請以英文說明書為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
8. 有效期：6個月

ELISA試劑盒實驗操作的常見問題：

1. 問--客戶用48T試劑盒，大概只有十個樣所以他一次用不完那么多板條,，但是他想做兩次,，可封板膜只有一張，那如果用完了怎么辦,？可以用什么別的東西取代嗎,？
答--可以把封板膜剪掉，用多少剪多少也可以用封口膜替代,。
2. 問--實驗過程中溫育是放在哪溫育呢,？
答--可以在水浴箱、細(xì)胞培養(yǎng)箱和烘干箱里面都行,，只要恒定溫度為37度,。

“豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒”標(biāo)本處理

1、 只對試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本,。

2,、 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高,，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

3,、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性,，并注意留存樣本,。

4、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致  ELISA實驗結(jié)果偏差,。

5,、 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類樣本干擾因素 較多，如：細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況,。

6,、 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白,，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測出。

7,、 建議使用新鮮樣本,，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏 差。