中文名稱：豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒

組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

規(guī)格：96T/48T

性狀：液體

保存：2-8℃

有效期：6個(gè)月

“豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒”實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體,，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化的抗該指標(biāo)抗體,、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),，計(jì)算樣品濃度。

操作說明

1．試劑盒保存：-20℃(較長時(shí)間不用時(shí)),；2-8℃(頻繁使用時(shí)),。

2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,。

3．中,、英文說明書可能會(huì)有不*之處，請以英文說明書為準(zhǔn),。

4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。

試劑盒組成

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

溫育：操作同3,。

洗滌：操作同5,。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

試劑盒說明
1. 在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染,，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果,。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時(shí),，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)間,，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。而且，洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果,。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃,，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),。
4. 濃洗滌液會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。
6. 中,、英文說明書可能會(huì)有不*之處，請以英文說明書為準(zhǔn),。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個(gè)月

“豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒”標(biāo)本處理

1,、 只對試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本,。

2、 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,，如果標(biāo)本濃度過高,，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

3、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,，并注意留存樣本。

4,、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致  ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

5、 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類樣本干擾因素 較多,，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時(shí)間等,，所以可能存在檢測不出的情況。

6,、 某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測出,。

7、 建議使用新鮮樣本,，保存時(shí)間過長可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏 差,。