中文名稱：豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒

組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

規(guī)格：96T/48T

性狀：液體

保存：2-8℃

有效期：6個(gè)月

“豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒”實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度,。

操作說明

1．試劑盒保存：-20℃(較長時(shí)間不用時(shí)),；2-8℃(頻繁使用時(shí))。

2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,。

3．中、英文說明書可能會(huì)有不*之處,，請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn),。

4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象,，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

試劑盒組成

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

溫育：操作同3。

洗滌：操作同5,。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

“豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒”標(biāo)本處理

1,、 只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本,。

2、 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,，如果標(biāo)本濃度過高,，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

3、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,，并注意留存樣本。

4,、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致  ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

5、 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類樣本干擾因素 較多,，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時(shí)間等,，所以可能存在檢測(cè)不出的情況,。

6、 某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白,，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出,。

7,、 建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過長可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏 差,。