詳細介紹
中文名稱:“兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒”
組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。
規(guī)格:96T/48T
性狀:液體
保存:2-8℃
有效期:6個月
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,,制成固相載體,,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,計算樣品濃度,。
“兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒?”操作說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時),。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3.中,、英文說明書可能會有不*之處,,請以英文說明書為準(zhǔn)。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品(240 ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
120 ng/L | 5號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
60 ng/L | 4號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
30 ng/L | 3號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
15 ng/L | 2號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
7.5 ng/L | 1號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干,。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
溫育:操作同3,。
洗滌:操作同5,。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
ELISA試劑盒的優(yōu)點體現(xiàn):
·特異性高:進行了廣泛的非特異性排查,,避免了由于交叉反應(yīng)和干擾導(dǎo)致的實驗數(shù)據(jù)誤差。
·精 度 高:通過加標(biāo)回收率和線性稀釋實驗,,確保樣本值的準(zhǔn)確性,,精確度高于同類產(chǎn)品(較低的CV%)。
·重復(fù)性好:lot-to-lot檢測確保zui小的批間差異,。
·可靠性強:經(jīng)優(yōu)化的試劑盒組分可有效的zuzhi假陽性和假陰性試驗結(jié)果,。
·標(biāo)準(zhǔn)曲線:在保證精準(zhǔn)數(shù)據(jù)的前提下提供較寬的檢測范圍,以滿足需求,。
·價格低廉:*RD試劑,,國內(nèi)分裝配置,大大減少了客戶因為價格高而必須購買國產(chǎn)試劑盒的顧慮,。
“兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒”標(biāo)本處理
1,、 只對試劑盒本身負責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé),,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,,預(yù)留充足的樣本。
2,、 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,,如果標(biāo)本濃度過高,,應(yīng)對標(biāo)本進行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。
3、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,,建議進行預(yù)實驗驗證其有效性,,并注意留存樣本。
4,、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA實驗結(jié)果偏差,。
5、 若樣本為細胞培養(yǎng)上清,,因該類樣本干擾因素 較多,,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量,、采樣時間等,,所以可能存在檢測不出的情況。
6,、 某些天然蛋白或重組蛋白,,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,,而不被檢測出,。
7、 建議使用新鮮樣本,,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏 差,。