【兔子α干擾素ELISA試劑盒工作原理】

。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）,。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體,。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記,。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng),；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān),。

【每套試劑盒中內(nèi)容】(96T)

材料 數(shù)量

標(biāo)準(zhǔn)品 96T(2vial)

預(yù)包被抗體的96孔板 96T（8×12）

生物素標(biāo)記人ANG抗體 96T (1:100)

ABC（親和素-過氧化物酶復(fù)合物） 96T (1:100)

樣品稀釋液 96T×2

抗體稀釋液 96T×1

ABC稀釋液 96T×1

TMB顯色液A 96T×1

TMB顯色液B 96T×1

TMB終止液 96T×1

ELISA洗滌液 96T×1(1:25)

【需要而未提供的試劑和器材】

1． 37℃恒溫箱。

2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。

3． 自動洗板機,。

4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。

5． 蒸餾水,，容量瓶等

6． 干凈的試管和Eppendof管,。

【兔子α干擾素ELISA試劑盒注意事項】

1. 從-20℃取出的試劑盒，在4℃解凍guoye,。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,，避免解凍時出現(xiàn)的分層，否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。

2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。

3. 配制各種試劑時,，切記混勻！

4. 用戶在初次使用試劑盒時,，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,，以便試劑集中到管底。

5. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本都做雙份檢測,。

6. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活,！

7. 為免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

【洗板方法】

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

【樣品的準(zhǔn)備和保存】

樣品如果不立即分析,，應(yīng)分裝后冷凍保存,，且避免反復(fù)凍融,。

血清——用干凈試管收集血液,，室溫凝固2小時或4℃guoye，離心1000×g 10分鐘,，收集血清,。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細胞培養(yǎng),、組織勻漿,、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存,。

【樣品稀釋的一般原則】

用戶須查閱文獻了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量,，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍,。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄,。

【試劑的準(zhǔn)備和保存】

A. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，*溶解后做倍比稀釋,。

8稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品在2小時內(nèi)使用,。

B．生物素標(biāo)記抗體工作液：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。

1.  根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）,。

2．按10ul生物素標(biāo)記抗體稀釋液990ul的比例配制工作液,。輕輕混勻。

C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準(zhǔn)備：在使用前1小時內(nèi)準(zhǔn)備,。

1．根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實配時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）,。

2．按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻,。

D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備：在使用之前30分鐘,，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

【操作程序】

1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,。

2． 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入,。

3． 酶標(biāo)板加上蓋,，37℃反應(yīng)90分鐘。

4． 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次,。

5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應(yīng)60分鐘。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,，每次浸泡1分鐘左右,。

7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘,。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,，每次浸泡1-2分鐘左右。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,，37℃避光反應(yīng),，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察,，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔,。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）,。

10． 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。

11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,，其實際濃度應(yīng)該×N。

【兔子α干擾素ELISA試劑盒操作程序總結(jié)】：

準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)90分鐘

洗板2次，加入生物素化人ANG抗體工作液,，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次,，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,，加入TMB顯色液,，37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

30分鐘之內(nèi)讀OD值

計算標(biāo)本待測因子含量

【特異性】： 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應(yīng)。

【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃

【有效期】： 12個月（-777℃）,。

【用途】： 用給我留言于體外定量分析液體標(biāo)本（通用型