詳細(xì)介紹
兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒概述:
待檢標(biāo)本:包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
規(guī) 格:96T/48T
性 狀:液體
保 存:2-8℃
需要而未提供的試劑和器材:
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),用多通道移液器
6. 蒸餾水,,容量瓶等
兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),,均需混勻,,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,,如樣品濃度過(guò)高時(shí),,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1.加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌,。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),,酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3.溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板3次,,每次浸泡1-2分鐘,,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),。
4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5.溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板5次,,每次浸泡1-2分鐘,,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),。
6.依序每孔加底物溶液90μl,,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,,后3-4孔梯度不明顯,,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,,終止反應(yīng),,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè),。
兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存試劑,。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,,避免交叉污染。
2.加樣:加樣或加試劑時(shí),,請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,,酶結(jié)合物或底物時(shí),,*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間,,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用多道移液器加樣,。
3.孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度,。
4.洗滌:洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液,、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆,。請(qǐng)精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,,盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),,以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液,。
6.反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),,如顏色較深,,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。
7.底物:底物請(qǐng)避光保存,,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù),。
公司常見產(chǎn)品:
人常見ELISA試劑盒系列
人:IL-1,、IL-1α、IL-1β,、IL-2,、IL-2R、IL-27,、IL-23,、IL-17、IL-18,、IL-9,、IL-8、IL-6,、IL-5,、IL-4、IL-2,、IL-13,、IL-11、IL-10,、IL-12P70,、IL-12P40、IFN-ω,、IFN-β,、IFN-α、 IFN-γ,、TNF-β,、TNF-α、sICAM-1,、LEP,、MMP-3等
大鼠常見ELISA試劑盒系列
大鼠:TNF-α、IL-1β,、IL-7,、IL-32、IL-21,、IL-27,、IL-23、IFN-γ,、TGF-α,、TGF-β1等
小鼠常見ELISA試劑盒系列
小鼠:IFN-γ,、IL-1α、IL-1β,、IL-13,、IL-10、IL-11,、IL-17,、TNF-α、TNF-β,、VEGF,、TGF-β1等
另有兔、豬,、猴,、雞、鴨,、羊,、植物等多種種屬ELISA試劑盒,所有試劑盒經(jīng)過(guò)充分驗(yàn)證,,保證有效且重復(fù)性佳,。