兔抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒概述：

待檢標本：包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等,。

規(guī)    格：96T/48T

性    狀：液體

保    存：2-8℃

需要而未提供的試劑和器材：

1.  標準規(guī)格酶標儀

2.  高速離心機

3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.  干凈的試管和Eppendof管

5.  系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,，一次檢測樣品較多時,，用多通道移液器

6.  蒸餾水，容量瓶等

兔抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒操作步驟：

實驗開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解),；試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1.加樣：分別設(shè)空白孔,、標準孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),，酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約400μl/每孔,，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5.溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔,，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止),。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng),，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進行檢測,。

兔抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒實驗注意事項：

1.試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,，避免交叉污染,。

2.加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品,，酶結(jié)合物或底物時,，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間,，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性,。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣,。

3.孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度,。

4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù),。

5.試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標準品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請精確配置標準品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差,；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,，每隔10分鐘),，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù),。

7.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射,。建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準確性。

如標本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

公司常見產(chǎn)品：

人常見ELISA試劑盒系列

人：IL-1,、IL-1α,、IL-1β、IL-2,、IL-2R,、IL-27、IL-23,、IL-17,、IL-18、IL-9、IL-8,、IL-6,、IL-5、IL-4,、IL-2,、IL-13、IL-11,、IL-10,、IL-12P70、IL-12P40,、IFN-ω,、IFN-β、IFN-α,、 IFN-γ,、TNF-β、TNF-α,、sICAM-1,、LEP、MMP-3等

大鼠常見ELISA試劑盒系列

大鼠：TNF-α,、IL-1β、IL-7,、IL-32,、IL-21、IL-27,、IL-23,、IFN-γ、TGF-α,、TGF-β1等

小鼠常見ELISA試劑盒系列

小鼠：IFN-γ,、IL-1α、IL-1β,、IL-13,、IL-10、IL-11,、IL-17,、TNF-α、TNF-β,、VEGF,、TGF-β1等

另有兔、豬、猴,、雞,、鴨、羊,、植物等多種種屬ELISA試劑盒,，所有試劑盒經(jīng)過充分驗證，保證有效且重復(fù)性佳,。