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蛋白酶,人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒

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更新時間:2015-12-31 15:24:22瀏覽次數(shù):756

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產(chǎn)品簡介

人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒加受檢標本,保溫反應(yīng),。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì),。

詳細介紹

人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒資料:
規(guī)    格 (48T/96T)
樣品類型  血清,、血漿、細胞培養(yǎng)上清等樣品類型
檢測方法  酶聯(lián)免疫法
特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性
交叉反應(yīng)  由于當前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識有限,,現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物,。因此,交叉反應(yīng)可能仍然存在
樣 本 量  50-100 μL
實驗時間  1–4.5h
儲存條件  2-8°C
儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達1個月(專家建議:4°C恒溫保存,,酶免試劑盒實驗效果更佳),。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋,,避免潮濕
有 效 期  6 months
人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒的原理
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性,。在測定時,,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,。再加入酶標記的抗原或抗體,,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,,使測定方法達到很高的敏感度,。
elisa試劑盒使用注意事項:
1、Elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2,、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,。
3,、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4、請每次測定的同時做標準曲線,,做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5、嚴格按說明書的操作進行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6,、本試劑不同批號組分不得混用,。
7、封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
8、所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9、底物請避光保存,。
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,,操作步驟如下:
(1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體,。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),。
(2) 加受檢標本,保溫反應(yīng),。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì),。
(3) 加酶標抗體,,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合,。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體,。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。
(4) 加底物顯色,。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,,測知標本中抗原的量,。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,,例如HBsAg,、HBeAg、AFP,、hCG等,。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法,。如抗體的來源為抗血清,,包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物,。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng),,作一步檢測,。
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,,此時反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,,圖1-4),如按常法測讀,,所得結(jié)果將低于實際的含量,,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落,。鉤狀效應(yīng)嚴重時,,反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg,、AFP和尿液hCG等)時,,應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng),。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物,。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題,,HBsAg有adr、adw,、ayr,、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性,,這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問題,。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風(fēng)濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,,多為IgM型,,能和多種動物IgG的Fc段結(jié)合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,,它可充當抗原成份,,同時與固相抗體和酶標抗體結(jié)合,表現(xiàn)出假陽性反應(yīng),。采用F(ab')或Fab片段作酶結(jié)合物的試劑,,由于去除了Fc段,,從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,,已被列為這類試劑的一項考核指標,。
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,,因其不能形成兩位點夾心,。
人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒樣品要求
客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。
檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清,、人和動物的血清,、血漿。
樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存,,若長期保存應(yīng)-70℃,。
樣本量的要求:若一個指標做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測應(yīng)不少于120ul,。建 議若客戶樣本量充足提供500ul以上,。
客戶的樣本收集后,立即按要求保存,,切忌反復(fù)凍融,。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與溝通確認,。

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