人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí),，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。
人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒特點(diǎn)概述
1.專(zhuān)一性強(qiáng)?？乖c抗體的免疫反應(yīng)是專(zhuān)一反應(yīng),，而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，所檢測(cè)的對(duì)象是抗原(或抗體),，使用的抗體除標(biāo)記了酶以外,，與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無(wú)多大差別。
2.靈敏度高,。由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,，因此，借助于酶與底物的顯色反應(yīng),，顯示抗原與抗體的結(jié)合,，大大提高了檢測(cè)的靈敏性，使檢測(cè)水平接近放射免疫測(cè)定法,。
3.樣品易保存,。經(jīng)過(guò)酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存,。
4.結(jié)果易觀察,。對(duì)檢測(cè)結(jié)果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察,，也可以用分光光度計(jì)進(jìn)行比色測(cè)定,，還可用顯微鏡觀察,。這是因?yàn)槟承┟阜磻?yīng)產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測(cè)物的顯示,。
5.可以定量測(cè)定,。溶液中的抗原物質(zhì)，應(yīng)用酶免吸附技術(shù)進(jìn)行比色測(cè)定,，依據(jù)光密度值的變化,，可以定量。預(yù)計(jì)用細(xì)胞分光光度計(jì)可對(duì)組織內(nèi)的抗原進(jìn)行免疫酶技術(shù)的定量測(cè)定,。
6.可以大規(guī)模測(cè)定樣品,。如有成千上萬(wàn)份樣品需要進(jìn)行檢測(cè)，免疫酶技術(shù)都能在較短時(shí)間內(nèi)完成,。
7.儀器和試劑簡(jiǎn)單,。對(duì)免疫沒(méi)技術(shù)來(lái)說(shuō)，不需要熒光顯微鏡,，也不需要測(cè)定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性?xún)x器與試劑,，普通實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)應(yīng)用單位均易購(gòu)置
8.*,，質(zhì)量保證，zui大限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。
人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒操作步驟
1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）,、空白孔,、待測(cè)樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簻?zhǔn)備小試管6 只,，依次編好號(hào)碼,，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔,。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置30 秒棄去,，如此重復(fù)5 次，拍干,。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí),。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔，靜置15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板5次,，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul,。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液,。
12）讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值,。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),，以免影響準(zhǔn)確性,。
數(shù)據(jù)計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，即為樣品的實(shí)際濃度。
人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染,。
2）加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。
3）孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行,。
4）反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。
5）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高,，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。
6）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本）,，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商,，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存：2-8℃
2.有效期：6個(gè)月
購(gòu)買(mǎi)人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒客戶(hù)須知
1,、液體類(lèi)標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿,、血清,、血漿、尿液,、胸水,、腹水、腦脊液等）,；
2,、樣本保存：請(qǐng)盡早檢測(cè)，2-8℃保存一天；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,。如需周期收集樣本,，請(qǐng)將樣本及時(shí)分裝標(biāo)號(hào)后，置-20℃或-70℃保存,；
3,、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬、樣本數(shù)量,、待測(cè)指標(biāo)及其他特殊要求,。