詳細(xì)介紹
人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒試驗(yàn)原理
ELISA檢測(cè)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,,然后加入底物A、B,,和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系,。
1. 可在450nm處進(jìn)行讀數(shù)的酶標(biāo)儀;
2. 能精確吸取10-200μL的移液器,;
3. 可調(diào)多道(8)移液器(50-200μL),;
4. 供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽;
5. 洗瓶或洗板機(jī),;
6. 蒸餾水或去離子水,;
7. 1升的圓柱形量筒;
8. 移液器:1和(10或25 mL),;
9. 移液器槍頭,;
10. 紙巾;
11. 計(jì)時(shí)器,,用以監(jiān)控溫育步驟,;
安全性
1)避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2)實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)*,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9)按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
試劑的準(zhǔn)備
1)標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。
2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。
人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒操作步驟
1)使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2)根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。 每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時(shí)。
4)甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3 次,。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。
6)甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7)每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。
ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn)
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。
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人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒訂貨說(shuō)明
1)賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持*,;
2)為了確保買方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量,,對(duì)有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸。
3)收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題,,買方需在收到貨物一個(gè)月內(nèi)向賣方提出書面異議,。買方逾期不提出異議,視為貨物符合其要求,,賣方不付任何責(zé)任,。
4)出現(xiàn)質(zhì)量以外的問(wèn)題,如破損等,,買方應(yīng)在收貨后一個(gè)周內(nèi)提出,。買方未按時(shí)提出異議,視為該產(chǎn)品合格,。
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