人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒試驗原理
ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物,，然后加入底物A、B,，和酶結合物同時作用,。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系,。
產品規(guī)格
規(guī)格 可測樣數(shù) 標準孔 空白對照 產地 庫存
96T      85個樣    10       1         進口 現(xiàn)貨
48T      37個樣   10        1         進口 現(xiàn)貨
自備材料
1）蒸餾水,。
2）加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200ul,、500ul,、1000ul。
3）振蕩器及磁力攪拌器等,。
安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。
2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒操作注意事項
1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7）底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手   接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8）加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9）按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集,、處理及保存方法
1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
試劑的準備
1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻,。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒操作步驟
1）使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。 每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內,。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4）甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3   次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8）取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值,。
6號標準品以上的結果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果。
ELISA試劑盒優(yōu)點
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內,、板間變異系數(shù)均小于10%。
人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒結果判斷與分析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的待測物質含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。