【名稱】：人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒

【規(guī)格】：48T/96T
【方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
【性狀】： 液態(tài)
【Elisa試劑盒種屬】馬鈴薯、鹿,、羊,、雞、鴨,、魚,、人,、大鼠、小鼠,、豚鼠,、倉(cāng)鼠、裸鼠,、兔子,、豬、犬,、猴,、馬、牛等動(dòng)植物,。
【標(biāo)本】血清,、血漿、細(xì)胞上清液,、尿液,、體液、灌洗液,、腦脊髓,、心房水、胸房水,、組織等
【用途】：科研 實(shí)驗(yàn)
【貯存】： 貯存于2℃-8℃.如有需要,，我們將竭城為顧客提供售前，售中,，售后的*服務(wù)!
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒樣品收集,、處理及保存
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
2）細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè)。
3）血清：在室溫下,，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè),。
4）血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
5）體液：包括胸腹水,、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
6.）組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本,，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
7）保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒操作步驟
1）取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）,、空白孔,、待測(cè)樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只,，依次編好號(hào)碼,，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔,。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去,，如此重復(fù)5 次，拍干,。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí),。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板5次,，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul,。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液。
12）讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值,。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性,。
數(shù)據(jù)計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，即為樣品的實(shí)際濃度。
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染,。
2）加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。
3）孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4）反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,，如果顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,，如樣品濃度過(guò)高,，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋數(shù),。
6）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,，可和所購(gòu)經(jīng)銷商,，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換,，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒退換貨政策
若發(fā)生退換貨需求，請(qǐng)先致電客服人員。符合退換貨政策的,，我司將與您簽訂退換貨協(xié)議,，并根據(jù)協(xié)議進(jìn)行退換貨。
特別說(shuō)明,，以下情況不予辦理退換貨：
1,、客戶在訂購(gòu)產(chǎn)品時(shí)請(qǐng)仔細(xì)確認(rèn)后再行訂購(gòu)，由客戶選型失誤而造成的退貨需求,，我方不承擔(dān)任何責(zé)任,。產(chǎn)品大多性質(zhì)較為特殊，存儲(chǔ)方式復(fù)雜,，請(qǐng)用戶按照貯存條件說(shuō)明妥善保存,。
2、已超過(guò)受理期限的產(chǎn)品,；
3,、產(chǎn)品無(wú)標(biāo)簽，或標(biāo)簽已無(wú)法識(shí)別是否屬于我司試劑的產(chǎn)品,；
4,、密封產(chǎn)品原包裝打開，一次性封貼或膠條破損（質(zhì)量問題除外）,；
5,、產(chǎn)品已使用（質(zhì)量問題除外）；
6,、由于您的操作原因,、使用環(huán)境限成的誤報(bào)以及實(shí)際情況與您描述不符，我司將不予受理申請(qǐng)退貨,；
7,、涉及產(chǎn)品退回，客戶需要與我們客服人員并按照相關(guān)指導(dǎo)操作運(yùn)輸事宜,。

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