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今日主題:ELISA成功的原因重在點子上
閱讀:1141 發(fā)布時間:2015-3-30[導讀] ELISA實驗成功的原因有哪些?您的實驗思路是怎樣的,?ELISA試劑盒作為上海滬鼎生物公司主營且熱銷的產品之一,,ELISA實驗技術問題必然是售后服務中的一大焦點,。日前上午9時,,我公司展開2015酶聯(lián)免疫技術交流會,,會議主題也正是我公司今日資訊主題:ELISA實驗成功的原因重在“點子"上。
會中,,我公司技術總監(jiān)表示:從標本的采集到實驗操作步驟完畢,,每一個流程都是影響實驗的因素。當然,,這是在試劑盒質量保證且正確保存的條件下,。為什么說ELISA實驗成功的原因重在“點子"上,?只要每一步流程都能夠達到正確的“點"上,那么您定能夠做出的實驗,。
一,、檢測標本的收集
①收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管,。
②血漿抗凝劑推薦使用EDTA,。避免使用溶血,,高血脂標本?! ?/span>
③標本應清澈透明,,懸浮物應離心去除?! ?/span>
④標本收集后若不及時檢測,,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃,,-70℃電冰箱內,,避免反復凍融,3-6月內檢測,。
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本,,及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,,-70℃凍存?zhèn)溆谩吮緫苊夥磸蛢鋈凇?/span>
二,、不斷學習ELISA操作技巧
1.操作前應對實驗的物理參數(shù)有充分的了解,,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應孵育溫度和孵育時間,、洗滌的次數(shù)等,,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求,。
2.正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,,血清殘留在反應孔壁上,,加樣器吸頭要清洗干凈,,避免污染,加樣次序要與說明書一致,,否則可導致結果錯誤,,實驗重復性差。
3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),,洗液在反應孑L內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,,造成孔問污染,,導致假陰性或假陽性。
4.要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,,滴瓶不易控制加液量不準,,造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯誤,。
5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,,加顯色系統(tǒng)后要避光反應,顯色液量不能過多,,以免顯色過強,。
三、操作示意圖
操作指南:固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果
四,、OD值的范圍
在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的,,不容小覷。說到OD值范圍,,我公司業(yè)務員在售后問題的處理過程中也常會有客戶咨詢其范圍是多少,。其實是不一定的,我們以AβELISA為例,,2以上就會偏飽和,,變化不容易做出來,所以一般把model組控制在0.8-1.5,,而control組的話基本跟空白差不多,,不到0.1。
所以,,一般情況下我們會建議先做個標曲以及樣品的梯度稀釋,,然后選擇在標曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
同時,,也與使用的detector有關,,detector有自己的檢測范圍和線性范圍。如果實驗室使用的儀器,說明書上說檢測范圍是0~4,,線性范圍是0~3,,但我們自己的實驗結果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測空白的沒有經過處理的Elisa孔,,大致在0左右,。
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上海滬鼎生物科技有限公司
2015年03月30日