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滬鼎解說 ELISA試劑盒原理及清洗
閱讀：724 發(fā)布時間：2014-9-24 根據(jù)上海滬鼎技術(shù)部研究呈現(xiàn),，美國TSZ品牌ELISA試劑盒有雙抗夾心法,、間接法、競爭法,、捕獲包被法,、ABS這五種檢測系統(tǒng)，應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)原理是：用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。
將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入 孔中并孵育,，如果其中存在HEV IgM抗體,，這些抗體就會與HEV的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面,，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后,，酶結(jié)合物就會與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,，加入TMB底物溶液,，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),，并在波長：450nm處測量O.D.值,，按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn)，O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性,。
·ELISA試劑盒的清洗
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA),。已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B,，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系,。
免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開的原料,，如抗原抗體,，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的 單克隆抗體,，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,，使用 基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的ELISA試劑盒測定方法也不斷出現(xiàn),。