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進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品分析其中elisa標(biāo)準(zhǔn)化是怎樣的
閱讀：949 發(fā)布時(shí)間：2014-3-26 今天是雨后晴天,，陽(yáng)光大好，滬鼎生物要給朋友們說到特別的東西,，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品與elisa之間,。來看看進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品分析其中elisa標(biāo)準(zhǔn)化是怎樣的。
在這里,，比較重要的是對(duì)稀釋的稱重校正以及比對(duì)一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的許多稀釋度的測(cè)定,，要求覆蓋整個(gè)范圍呈線性，并且回歸要通過零點(diǎn),，根據(jù)回歸線的斜率定值。血清蛋白和載脂蛋白的標(biāo)準(zhǔn)晶與大多數(shù)其他非純化蛋白的以血清為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)品不一樣,，因此,，其可被直接用于對(duì)zui終校準(zhǔn)品的定值,。因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品以血清為基礎(chǔ)，所以基質(zhì)效應(yīng)上的差異基本上可以排除,。
對(duì)于激素和腫瘤標(biāo)志物來說,，一級(jí)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品通常稀釋于人工含蛋白的緩沖液中，對(duì)所有復(fù)溶和稀釋都應(yīng)進(jìn)行稱重校正,，并根據(jù)不同稀釋度的回歸線的斜率定值,。復(fù)溶后，一級(jí)和校準(zhǔn)的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)分裝成小包裝,，密封于玻璃安瓿中一70℃下保存,。二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品通常用低蛋白含量的緩沖液制備，但校準(zhǔn)品應(yīng)以血清為基質(zhì)或用蛋白含量類似于血清的緩沖液制備,。這一點(diǎn)對(duì)用來傳遞值的測(cè)定方法有較嚴(yán)格的要求,，即其基本不受基質(zhì)不同的影響?？赏ㄟ^測(cè)定稀釋于零校準(zhǔn)晶中的樣本來確證沒有基質(zhì)效應(yīng),。理想情況下，應(yīng)使用參考方法來進(jìn)行值的傳遞,，但對(duì)于多肽激素和腫瘤標(biāo)志物來說尚無(wú)此類方法,。用于校準(zhǔn)品制備的無(wú)內(nèi)源性激素的基質(zhì)，可使用已去掉激素的病人血清,?？赏ㄟ^使用特異抗體的免疫吸附方法將多肽激素從血清中去除，但這種方法常會(huì)少量抗體在血清中,，這種抗體對(duì)相應(yīng)的免疫測(cè)定方法會(huì)有所干擾,。有時(shí)也使用動(dòng)物血清或人工蛋白緩沖液作為制備基質(zhì)，這些基質(zhì)各有其優(yōu)缺點(diǎn),。人血清是zui自然的基質(zhì),，但較難大量得到，使得每批標(biāo)準(zhǔn)品的量有限,，需頻繁更換,，每批之間總會(huì)有微小差異。動(dòng)物血清雖可大量得到,，但其整體上的特性與人血清是不一樣的,，并且動(dòng)物激素與人激素可能會(huì)有交叉反應(yīng)。蛋白緩沖液則缺乏正常血清中所具有的大部分干擾物質(zhì),，如果樣本體積相對(duì)總的測(cè)定體積較小(10％～15％)的話,，這些影響通常可以忽略不計(jì)。
對(duì)于類固醇激素來說,，由于結(jié)合蛋白的干擾,，對(duì)結(jié)合蛋白的激素的直接測(cè)定的校準(zhǔn)較為復(fù)雜。因?yàn)榻Y(jié)合蛋白的親和力與所使用的測(cè)定抗體相類似,，所以在測(cè)定中必須使用分離物質(zhì)以替代離開結(jié)合蛋白的激素,，很難在不干擾抗體結(jié)合的情況下*排除結(jié)合蛋白的影響。因此,，要有以血清為基礎(chǔ)的校準(zhǔn)品,。無(wú)類固醇的血清可通過木炭吸附的方式制備，可將溶解在乙醇中的純類固醇加入至去除內(nèi)源性類固醇的血清中制備校準(zhǔn)品,，但仍發(fā)現(xiàn)有異常結(jié)合蛋白可引起較大的偏差,，如具有高性激素結(jié)合球蛋白的樣本用于睪酮直接測(cè)定時(shí)結(jié)果偏低，但SHBG稍有異常的樣本,，則測(cè)定結(jié)果偏高,。除了結(jié)合蛋白，所有影響其他免疫測(cè)定的非特異因素也影響類固醇和甲狀腺激素的測(cè)定,。為改善方法的測(cè)定下限,，樣本在總的測(cè)定體積中的比例很高，因此,，存在于樣本中的非特異因素是測(cè)定誤差的重要來源,。對(duì)類固醇激素提取方法的校準(zhǔn)非常簡(jiǎn)單，標(biāo)準(zhǔn)品可得到商品純品,，將其稱量后溶于有機(jī)溶劑(通常為乙醇)可制備校準(zhǔn)品貯備液,，類固醇的含量可采用光電比色確認(rèn)。稀釋貯備液即可得到校準(zhǔn)晶應(yīng)用液,。
標(biāo)準(zhǔn)品定值的測(cè)定方法可使用參考方法,。
定義方法是一個(gè)具有高精密度及沒有系統(tǒng)偏差的參考方法。放射性核素稀釋質(zhì)量分光光度法可作為類固醇激素和其他一些小分子測(cè)定的定義方法,，但這種方法極為昂貴因此難于大規(guī)模使用,。用于蛋白測(cè)定的質(zhì)量分光光度法雖在快速發(fā)展，但仍無(wú)合適的方法用于復(fù)雜生物學(xué)樣本中低濃度多肽的定量測(cè)定,。當(dāng)沒有定義方法可使用時(shí),，則可確定一個(gè)參考方法，例如有人提出了載脂蛋白B的參考方法,。hCG測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化工作組推薦了可用于不同hCG變異體測(cè)定的參考方法,。這種參考方法應(yīng)有低測(cè)下限、不受非特異干擾及不與相關(guān)的化合物發(fā)生交叉反應(yīng),，同時(shí)還應(yīng)該容易得到,。盡管所有關(guān)鍵試劑都相同，但在測(cè)定具體設(shè)計(jì)上的差異仍會(huì)引起偏倚，因此,，有必要建立一個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室的網(wǎng)絡(luò),，以保持參考方法的有效性。
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