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滬鼎分享實(shí)驗(yàn):免疫組化,,八步驟三特點(diǎn)

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步驟

1、石蠟切片置于67℃烘箱中,,烘片2小時(shí),,脫蠟至水,用pH7.4的PBS沖洗三次,,每次3分鐘(3×3’),。
2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,,加入微波盒中,,微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,,放入已沸騰的緩沖液中,中檔微波處理10分鐘,,取出微波盒流水自然泠卻,,從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,,之后用PBS沖洗2×3’,。
3、每張切片加1滴3%H2O2,,室溫下孵育10分鐘,,以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’,。
4,、除去PBS液,每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體(相應(yīng)稀釋倍數(shù)),,室溫下孵育2小時(shí),。
5,、PBS沖洗3×5’。除去PBS液,,每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑,,室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’,。
6,、除去PBS液,每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物,,室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’。
7,、除去PBS液,,每張切片加1滴新鮮配制的DAB液(二氨基聯(lián)苯胺),顯微鏡下觀察5分鐘,。
8,、蘇木素復(fù)染,0.1%HCl分化,,自來(lái)水沖洗,,藍(lán)化,切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,,二甲苯透明,,中性樹膠封固,晾干后觀察,。

特點(diǎn)
1,、在切片加上一抗后,第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶(HRP)的復(fù)合物與一抗結(jié)合,,在多聚螯合物上有大量的HRP分子,,使抗原信號(hào)有顯著的放大,其敏感性較SABC,、SP法高,。
2、由于多聚物在體內(nèi)不存在,,又不使用生物素,,從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色,背景比SABC,、SP法清晰,。
3、辣根過(guò)氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上,替代傳統(tǒng)方法的 二抗,、三抗,,減少了實(shí)驗(yàn)步驟,且試劑孵育時(shí)間短,,只需15分鐘,,使得免疫組化方法更簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)時(shí)間比SABC,、SP法大為縮短,。

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