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步驟

1、石蠟切片置于67℃烘箱中,，烘片2小時,，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次,，每次3分鐘（3×3’）,。
2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,，加入微波盒中,，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中,，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片,，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’,。
3,、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’。
4,、除去PBS液,，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時,。
5,、PBS沖洗3×5’。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強劑,，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’,。
6,、除去PBS液,，每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’,。
7、除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺）,，顯微鏡下觀察5分鐘。
8,、蘇木素復染,，0.1%HCl分化，自來水沖洗,，藍化,，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明,，中性樹膠封固,，晾干后觀察。

特點
1,、在切片加上一抗后,，第二抗體標記多聚螯合物酶（HRP）的復合物與一抗結(jié)合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子,，使抗原信號有顯著的放大,，其敏感性較SABC、SP法高,。
2,、由于多聚物在體內(nèi)不存在，又不使用生物素,，從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色,，背景比SABC、SP法清晰,。
3,、辣根過氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上，替代傳統(tǒng)方法的 二抗,、三抗,，減少了實驗步驟，且試劑孵育時間短,，只需15分鐘,，使得免疫組化方法更簡單，實驗時間比SABC,、SP法大為縮短,。

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