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滬鼎分享實(shí)驗(yàn)：免疫組化,，八步驟三特點(diǎn)
閱讀：764 發(fā)布時(shí)間：2014-4-1| 提 供 商 | 上海滬鼎生物科技有限公司 | 資料大小 | 95.3KB |
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| 資料類型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 764次 |
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步驟
1、石蠟切片置于67℃烘箱中,，烘片2小時(shí),，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次,，每次3分鐘（3×3’）,。
2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,，加入微波盒中,，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘,，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次,，之后用PBS沖洗2×3’,。
3、每張切片加1滴3%H2O2,，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’,。
4,、除去PBS液，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,，室溫下孵育2小時(shí),。
5,、PBS沖洗3×5’。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑,，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’,。
6,、除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物,，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’。
7,、除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘,。
8,、蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化,，自來(lái)水沖洗,，藍(lán)化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明,，中性樹膠封固，晾干后觀察,。
特點(diǎn)
1,、在切片加上一抗后，第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶（HRP）的復(fù)合物與一抗結(jié)合,，在多聚螯合物上有大量的HRP分子,，使抗原信號(hào)有顯著的放大，其敏感性較SABC,、SP法高,。
2、由于多聚物在體內(nèi)不存在,，又不使用生物素,，從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色，背景比SABC,、SP法清晰,。
3、辣根過(guò)氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上，替代傳統(tǒng)方法的 二抗,、三抗,，減少了實(shí)驗(yàn)步驟，且試劑孵育時(shí)間短,，只需15分鐘,，使得免疫組化方法更簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)時(shí)間比SABC,、SP法大為縮短,。
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