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技術(shù)文章

華東師范大學(xué)朱同學(xué)來電咨詢技術(shù)問題

閱讀:1253          發(fā)布時間:2015-12-23

      華東師范大學(xué)朱同學(xué)說:做了十多次的Elisa,能夠得到線性比較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線,,但是同樣濃度的標(biāo)準(zhǔn)品每次的OD值都不一致,,樣品就更加慘不忍睹了,除了酶標(biāo)板之外,,其余封閉蛋白,,抗體,,抗體稀釋度,等等條件都已經(jīng)更換過,,但是問題還是沒能解決,,懷疑是酶標(biāo)板的問題。有什么方法可以快速驗證酶標(biāo)板的可靠性,。
      錢分析:elisa本身靈敏性很高,,每次做出來的值不一樣很正常,特別是od值比較大的時候更是差別很大,,但是只要不要偏差太大就好,,一般偏差要求10%內(nèi)吧,好的數(shù)據(jù)是3%內(nèi),。首先要穩(wěn)定所有的條件,,不同的條件下做的板子讀值不一樣很正常。在同樣條件下同批次的板子,,如果測定不一樣,,就是包被問題或者保護劑的問題,但這兩個都是各個試劑盒的機密,,看看文獻里別人怎么做的,。其次每次實驗的標(biāo)曲上同一濃度樣品的OD值不一樣是很正常的,這與抗原抗體反應(yīng)體系,、作用時間,、顯色時間等等一系列的因素有關(guān)。鑒定該ELISA體系是否可靠,,zui關(guān)鍵的指標(biāo)是加標(biāo)回收率和稀釋線性,,如果你懷疑的話可以做一下。一般來說,,國外廠商的ELISA試劑盒是沒有問題的,。同時你還要看一下說明書中ELISA試劑盒的靈敏度,如果你的樣品濃度低于該檢測下限,,則無法檢測到,這是很正常的現(xiàn)象,,并不是非要每個樣品都要測出值才可以,。

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