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選擇ELISA試劑盒的小秘籍
閱讀:1547 發(fā)布時間:2015-9-23 為什么選擇ELISA試劑盒,?
以TNF-a為例,,Meso Scale Discovery? Vplex電化學(xué)發(fā)光試劑盒以0.04pg/mL的靈敏度是普通ELISA(7 pg/mL左右)的100多倍。如果實驗樣本中的TNF-a低于7pg/mL,這就意味著實驗數(shù)據(jù)會無法檢測,,實驗沒有定量結(jié)論,。另外一個案例,臨床常規(guī)測定普通CRP的方法檢測線性一般為3~200mg/L,,而預(yù)測心血管事需要更高靈敏度的CRP,,超敏或高敏CRP (hs-CRP)。
ELISA試劑盒檢測什么樣本,?試驗周期多長,?
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
如實驗研究周期較長,,ELISA試劑盒盡量選擇一個批次的,以防止不同批次間的差異,。然而由于普通ELISA有效期在3-12個月,,而實驗周期往往在1-2年以上,一些長期臨床實驗項目甚至在5-10年,,因而經(jīng)常面臨不同批次的挑戰(zhàn),。而Meso Scale Discovery?Vplex試劑盒經(jīng)過54個月穩(wěn)定性測試。