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Elisa技巧學(xué)習(xí)很重要
閱讀：1496 發(fā)布時間：2015-6-25Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)是需要操作者們自身積累的，但是掌握了實(shí)驗(yàn)技巧之后可對實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)與操作事半功倍,。Elisa技巧學(xué)習(xí)很重要,！下面一起來看看上海滬鼎生物公司今天給大家?guī)砹四男?shí)驗(yàn)技巧內(nèi)容：
抗原抗體反應(yīng)要求在zui適比例條件下進(jìn)行,，ELISA反應(yīng)試劑多,，其工作濃度不同對結(jié)果影響較大,，因此必須對包被抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)進(jìn)行*工作濃度的滴定和選擇，以達(dá)到*的測定條件,。
(一)方陣(棋盤)滴定法選擇包被抗原的工作濃度：
用包被液將抗原作一系列稀釋(1:50～l:800)后,，按行進(jìn)行包被、洗滌,。按列分別加入用稀釋液1:100稀釋的強(qiáng)陽性,、弱陽性、陰性參考血清及稀釋液(作空白對照),，保溫,，洗滌。加工作濃度酶標(biāo)抗體,，洗滌,，加底物顯色，加酸終止反應(yīng)后讀取A值,。選擇強(qiáng)陽性參考血清A值,；為0．8左右，陰性參考血清A值<0．1的包被抗原稀釋度為工作濃度,。
(二)方陣(棋盤)法選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度：
將抗體用包被液稀釋為10mg/L,、lmg/L、0.1mg/L三個濃度按行包被,，每一個濃度包被三行(每行3孔),，分別在每個濃度包被的*、二,、三行中分別加入強(qiáng)陽性抗原,，弱陽性抗原和陰性對照，將酶標(biāo)抗抗體用稀釋液稀釋為1:l 000,、l:5000,、l:10000三個濃度，分別加入每個濃度包被的*,、二,、三列中。加底物顯色,，加酸終止反應(yīng),，分別讀取A值。以強(qiáng)陽性抗原液A值在0.8左右,，陰性參考A值<0.1的條件為zui適條件,。據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的*工作濃度,。
抗體的稀釋度包括特異性抗體，中間抗體及標(biāo)記抗體,。任何一種免疫組化方法要想得到令人滿意的染色效果,，必須將抗體進(jìn)行*稀釋。一般來說,，抗體的稀釋度取決于下列因素,。
1.抗體的濃度(亦稱滴度)
每毫升溶液內(nèi)所含抗體分子越多，滴度就越高,，該抗體可高度稀釋,，尤其是特異性一抗的稀釋度。一般商品化抗體只知道每毫升含多少抗體蛋白量,，不知道所含抗體分子,。自己制備抗體可通過瓊脂糖雙擴(kuò)散或放射免疫法進(jìn)行測定。商品化抗體一般告知大約的稀釋度,，例如用PAP法可1：100～1：200稀釋,。但往往購買到一種新抗體后，需要利用組織切片進(jìn)行*稀釋度的測定,。
2.抗體的配制
抗體的配制及使用是開展免疫組織化學(xué)工作的一個重要環(huán)節(jié),，其檢測的結(jié)果既要可靠，又要能重復(fù),，這就要求實(shí)驗(yàn)人員在配制抗體過程中要注意其度,。目前,，隨著抗體稀釋液的穩(wěn)定性提高,，一次稀釋抗體可用一年。當(dāng)然,，還可以購買到商品化即用型一抗,，使用非常方便。
3.抗體稀釋液的種類
可根據(jù)需要選擇不同的抗體稀釋液,。如稀釋當(dāng)天用完的一抗,，用0.05m01/L(pH7.6)TBS即可。如需長期保存,，可用如下稀釋液：取0.1g明膠(或綠色明膠)溶在100ml0.05m01/L(pH7.6)TBS緩沖液中,，邊攪拌邊加熱至60℃，待*溶解后,，冷卻至室溫,，加入1g牛血清白蛋白，zui后加入200mg aN3,，分裝保存在一40℃中備用,。另外,，抗體原液應(yīng)分裝后一40℃保存，可保存5年以上,。
Elisa試劑盒應(yīng)保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。上海滬鼎生物公司提醒您：從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。咨詢采購高品質(zhì)進(jìn)口/國產(chǎn)Elisa試劑盒,，歡迎您致電我公司業(yè)務(wù)員。