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研發(fā)ELISA試劑盒過程中洗滌Z重要
閱讀：1072 發(fā)布時間：2015-6-2洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用,。如果洗液需要稀釋,，應(yīng)按要求稀釋，所用的水電導(dǎo)率在1.5us/cm 之下,，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制,。保證洗板浸泡時間為40 秒左右，孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好,，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡,。
洗滌在ELISA試劑盒研發(fā)過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗,。ELISA試劑盒研發(fā)就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，而在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELISA試劑盒研發(fā)操作中,，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),，應(yīng)引起操作者的高度重視,，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎,。
此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值,。酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指于測讀ELISA試劑盒研發(fā)結(jié)果吸光度的光度計(jì),。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度,、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性,、度和可測范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001,，準(zhǔn)確性為±1%,，重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,，操作時室溫宜在15~30℃,，使用前先預(yù)熱儀器15-30 分鐘,，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
測讀A 值時,，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,，如OPD 用492nm 波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,，即每孔先后測讀兩次,，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2）,，兩次測定間不 移動ELISA試劑盒研發(fā)板的位置,，zui終測得的A 值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),，也含親水基團(tuán),，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時,，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn),。