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ELISA實(shí)驗(yàn)用什么酶標(biāo)記抗原抗體
閱讀：3086 發(fā)布時(shí)間：2015-5-8今天上午,，來自北京市科研所的一位孫老師在我公司中在線到錢,。孫老師想要咨詢采購幾個(gè)指標(biāo)的大鼠ELISA試劑盒,，通過對(duì)產(chǎn)品的信息交流一番之后,，孫老師對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)提出疑問：ELISA實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用什么樣的酶來標(biāo)記抗原或者抗體呢,？
上海滬鼎生物公司是提供全程技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)的,，對(duì)此問題，我公司技術(shù)回復(fù)解釋。在ELISA中,，用酶標(biāo)記的抗體或抗原統(tǒng)稱為結(jié)合物,，此為進(jìn)行ELISA檢測(cè)的關(guān)鍵試劑。常規(guī)使用ELISA法的主要問題是能夠簡便地制備酶結(jié)合物,，而此種制備好的酶結(jié)合物要求穩(wěn)定,，具有很高的酶活性，抗原或抗體的特異性,，產(chǎn)量高及成本低,。
那么用什么樣的酶來標(biāo)記抗原或抗體呢？
1.酶制品的純度及活力高,，催化效力也高,，放大倍數(shù)大(即一個(gè)酶分子能催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng)的酶)。
2.酶及制備好的酶結(jié)合物在檢測(cè)或貯存中能保持穩(wěn)定,。
3.酶制劑易得,、價(jià)廉.
4.既要適用于標(biāo)記抗原，又適用于標(biāo)記抗體,，標(biāo)記后不影響抗原或抗體的免疫學(xué)特性,，也不降低酶的活性。
5.酶的反應(yīng)產(chǎn)物穩(wěn)定,，檢測(cè)時(shí)簡便,、快速。在定量測(cè)定中產(chǎn)物必須是可溶性的,。
6.要有安全,、價(jià)廉、易得的底物,。
符合上述條件的酶有：堿性磷酸酶,，一般用分子量為5×105(Alkaline Phospatase,簡稱AP)，辣根過氧化物酶(Horse Radish Peroxidase,簡稱HRP,分子量為4×104),另外尚有葡萄糖氧化酶,，β-半乳糖甙酶，糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等,。其中以前兩種(AP和HRP)zui為常用,。
AP活力高，制備好的酶結(jié)合物可加NaN3防腐,，但此種酶不易獲得,，因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取，而且價(jià)格比較昂貴,。因此,，目前國內(nèi)外大多使用HRP。HRP活性也高，價(jià)格較便宜,。但制得酶結(jié)合物不能加NaN3防腐,。因NaN3能抑制HRP的活性，但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝,，保存冰箱,，一般可用1-2年。
結(jié)合：用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來呢,？當(dāng)然不能用強(qiáng)烈的方法,，因?yàn)閺?qiáng)烈的方法會(huì)使酶和抗體失去活性。故只能用溫和的方法把酶和抗體結(jié)合起來,。因此,，必須使用結(jié)合劑。理想的結(jié)合劑應(yīng)具備下列條件：
1.不影響酶及抗體活性,；
2.不產(chǎn)生干擾物質(zhì),；
3.抗體和酶結(jié)合后應(yīng)有較高的產(chǎn)量；
4.不出現(xiàn)非特異性反應(yīng),；
5.結(jié)合程序簡便,；
6.來源易、價(jià)廉,。
目前常用的有戊二醛和過碘酸鈉二種,。由于對(duì)所使用結(jié)合劑的針對(duì)性，因此標(biāo)記的方法也有戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鈉氧化法兩類,。
問題解決之后,，孫老師夸贊上海滬鼎生物公司的產(chǎn)品服務(wù)完善、,、專業(yè),，并下單簽訂試劑盒產(chǎn)品。我公司專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒產(chǎn)品,，種屬齊全,，歡迎各位朋友們電詢我司業(yè)務(wù)員采購。