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    為了保證所測得的ELISA結(jié)果準(zhǔn)確,，操作在實(shí)驗(yàn)的過程中需要對常見問題及復(fù)雜步驟做足功課,，掌握了各個(gè)步驟的隱患之后，再去實(shí)驗(yàn)就會(huì)容易的多,。其中,，上海滬鼎生物特別說明這些ELISA步驟等您重點(diǎn)優(yōu)化：
一、ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化
    在這一過程中,，一般情況下有三次加樣,，它們分別是加標(biāo)本，加酶結(jié)合物,，加底物,。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均,，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡,，可上下倒置混和,，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固,、血塊收縮后即可取得,。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和,。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,，超過一周測定的需低溫冰存,。
    加樣示意圖：
   
二、ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化
    1.包被液的選擇：一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
    2.包被濃度的選擇：包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化,，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,，要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。
    3.包被溫度的選擇：通常是4-8度條件下放置一個(gè)晚上或者37度保溫2小時(shí),，我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,，有利于蛋白活性的保持。
    4.包被抗原的選擇：可分為天然蛋白,、重組蛋白和小分子抗原三大類,。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物，由于分子量太小,，往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)，比如BSA等偶聯(lián),，偶聯(lián)物吸附于固相載體上,。