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滬鼎推薦本周Z值得關(guān)注的實(shí)驗(yàn),，述制備核提取物的完整過程
閱讀：1031 發(fā)布時(shí)間：2014-2-27 一周之中的工作日不過只有五天,，時(shí)間的緊張是否讓您不知該瀏覽哪一個(gè)實(shí)驗(yàn)了呢,？不管是何事物，足夠才是zui重要的,。今天已經(jīng)周四了,，滬鼎推薦本周zui值得關(guān)注的實(shí)驗(yàn)，述制備核提取物的完整過程,。上海滬鼎以質(zhì)量求生存,，以信譽(yù)求發(fā)展的精神，精益求精,，力求做到更好,！
本次實(shí)驗(yàn)一共需要十二個(gè)步驟，看似麻煩,，我們?yōu)槟饤l整理好,，讓您了解中更明白。
1,、①收集轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞：將濃度為5~10×108細(xì)胞/l 的培養(yǎng)液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min,，將細(xì)胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L 培養(yǎng)液中的細(xì)胞）。進(jìn)行步驟2,。②收集單層培養(yǎng)的細(xì)胞：?jiǎn)螌蛹?xì)胞長(zhǎng)滿后去掉培養(yǎng)液,。用PBS洗1次。將細(xì)胞刮入新鮮PBS液里,，倒進(jìn)錐形離心管中,。進(jìn)行步驟2。
2,、1 850 g 離心10 min,。
3①轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)細(xì)胞：測(cè)量壓緊后細(xì)胞的體積,。將細(xì)胞重懸于約5倍于其pcv的PBS液中，1 850 g 離心10 min,。進(jìn)行步驟4,。②單層培養(yǎng)細(xì)胞：測(cè)量pcv，進(jìn)行步驟4,。
4,、快速地將沉淀的細(xì)胞重懸于5倍體積的低滲緩沖液中，1 850 g 離心10 min,。將細(xì)胞沉淀重懸于3倍于原pcv的低滲緩沖液中,，放置在冰上10 min，讓細(xì)胞腫脹,。
5,、在Dounce氏玻璃勻漿器中用B號(hào)研杵緩饅上下抽提10次以上。用臺(tái)盼藍(lán)染色排斥法在顯微鏡下檢査細(xì)胞裂解滑況（應(yīng)大于80%~90%）,。
6,、3 300 g 離心15 min，保留上清用來制備S-100細(xì)胞質(zhì)提取物,。
7,、測(cè)量第6步離心沉淀的壓緊后的細(xì)胞核體積。用1/2 pnv體積的低鹽緩沖液重懸細(xì)胞核（必要時(shí)用Dounce氏玻璃勻漿器勻漿一次）,。
8,、在輕輕攪拌的同時(shí)，逐滴加入1/2 pnv體積的高鹽緩沖液,。終濃度應(yīng)約為300 mmol/l,。
9、25 000 g 離心30 min,，測(cè)量核提取物的電導(dǎo)率（用上請(qǐng),，見步驟10）。
10,、將核提取物加入透析管中,，在50倍體積的透析液中進(jìn)行透析，直到提取物的電導(dǎo)率和透析液一致為止（當(dāng)提取物的KCl濃度達(dá)到100 mmol/l 時(shí)）,。盡量縮短透析時(shí)間,。
11、將提取物從透析袋中移出45 000 g 離心20 min,。
12,、用Bradford分析法測(cè)定上清中蛋白質(zhì)的濃度。分裝,，浸入液氮中速凍,，- 80℃保存,。
以上就是制備核提取物實(shí)驗(yàn)的十二個(gè)完整過程,，感謝您對(duì)上海滬鼎的支持,！在廣大客戶的支持和全體員工的努力下，公司正在日益發(fā)展和壯大,。全體員工孜孜不倦為國(guó)內(nèi)科研事業(yè)單位以及高校等提供的產(chǎn)品服務(wù),！